Estoy considerando varios suministros de laboratorio para un protocolo que vamos a ejecutar y me llamó la atención la notable diferencia de precio para diferentes niveles de calidad de la misma sustancia básica.
Sigma le venderá agua, por ejemplo, desde $ 15/L hasta $ 500/L e incluso más de $ 10,000/L, dependiendo del nivel de pureza garantizado. Obviamente, uno no quiere usar herramientas inferiores y resultados poco confiables garantizados, pero también sería una tontería usar un reactivo que es mucho más caro que las tolerancias reales de uno.
Sin embargo, la mayoría de los protocolos reales con los que me encuentro no parecen especificar qué grado de pureza necesitan, y estoy tratando de descubrir cómo solucionar el problema. Prueba y error definitivamente no es una buena opción, ya que (a) puede perder mucho tiempo y (b) los resultados buenos y malos en una prueba en realidad no le dicen lo que necesita (un buen resultado podría ser un resultado inusualmente bueno). buen lote de reactivo pobre; un mal resultado podría deberse a un problema completamente diferente). Preguntar a los autores tampoco es una gran solución, por varias razones similares.
Para concretar esto, consideremos un caso muy simple y típico que me encuentro actualmente. El protocolo que estoy configurando ahora cultiva E. coli en medios LB. Sigma me venderá polvo de medios LB como "calidad 100" L3152 a $ 139/kg y "calidad 200" L3522 a $ 182/kg. Ambos dicen que son "buenos para E. coli".
¿Hay alguna razón para no elegir los medios más baratos? ¿Cómo se debe decidir cuánta calidad deben tener sus medios para un experimento típico de cultivo bacteriano?
Parece que Merck tiene diferentes niveles de control de calidad para sus productos. Siendo MQ 100 el más bajo hasta MQ 600 siendo el más alto. Por lo que puedo ver, el producto MQ200 aquí tiene una composición definida (de sal, triptona y extracto de levadura en g/L) mientras que el producto MQ100 más económico no parece tener su composición asegurada.
Estoy seguro de que sus cultivos crecerán en medios más baratos, pero tal vez teóricamente perdería algo de replicabilidad y tal vez si estuviera haciendo experimentos centrados en el metabolismo, querría estar seguro de la composición de sus medios.
En cuanto al agua, siempre he usado agua destilada que luego se esteriliza en autoclave después de agregar los medios sin problemas.
La respuesta depende de la aplicación y el nivel de supervisión/cumplimiento que necesite. La mayoría de los laboratorios de investigación que he visto usan agua desionizada o incluso agua de ósmosis inversa (de un grifo) para la mayoría de las aplicaciones de medios de cultivo. Pero cuando estaba haciendo análisis de trazas de metales, tuve que usar agua de grado superior para casi todos los pasos de mi experimento. Principalmente, necesitábamos una certificación con cada lote de que nuestros analitos específicos estaban por debajo de los niveles aceptables (generalmente alrededor de 1 parte por mil millones). Pero incluso los reactivos de grado de "traza de metal" a menudo contenían hierro en niveles de partes por millón, por lo que tuvimos que pedir agua de grado aún más alto (más cara) cuando queríamos observar los cambios de nivel de traza en el metabolismo del hierro.
Un desafío es que hay pocos sistemas de calificación de calidad en toda la industria. La mayoría de ellos son específicos de un fabricante determinado, por lo que se necesita un poco de preparación para comprender qué significan específicamente. Por ejemplo, parece que el sistema M-Clarity utilizado para definir "calidad" en el enlace que compartió es un programa específico de Sigma-Millipore diseñado para ayudar a los clientes con la selección de productos para el cumplimiento normativo. Los niveles MQ 100 - MQ 400 parecen seguir todos los mismos estándares de fabricación de la industria ( ISO 9001 ) y solo varían en el nivel de análisis del producto y notificación de cambios ofrecidos a los clientes.
Si su laboratorio estuviera realizando control o garantía de calidad en una industria regulada, necesitaría asegurarse de que todos sus reactivos (y prácticas de laboratorio) cumplan con dichas regulaciones. Si está en un laboratorio de investigación, estas características adicionales pueden o no agregar valor a su trabajo, según las aplicaciones específicas que tenga en mente. Para la mayoría de las aplicaciones experimentales, es probable que no haya mucho valor agregado en recibir una notificación cada vez que un fabricante obtiene un proveedor de materias primas diferente, ya que la mayoría de los ingredientes de LB, como la triptona y el extracto de levadura, ya son sustancias complejas (no definidas). Por otra parte, si el objetivo de su investigación es optimizar el crecimiento de los reactores de fermentación industrial, esa información podría resultarle útil.
Esta respuesta solo se refiere a Streptococcus pneumoniae.
El laboratorio en el que trabajé usaba ingredientes baratos, lo mismo que todos los demás afirmaban en este campo.
Lo único impactante que encontré fue que los medios estériles (ya preparados) que me dieron para usar para la extracción de ADN no funcionaban (el ADN estaría fragmentado). Resultó que los medios habían estado esperando en la incubadora durante un año. Hizo nuevos medios y todo estuvo bien.
Caldo Todd-Hewitt (THB) con extracto de levadura al 0,5 % (YE)
3,0 % (p/v) de polvo de caldo Bacto™ Todd Hewitt (Difco cat# 249240)
0,5 % (p/v) de extracto de levadura Bacto™ (Difco cat# 288620)
jakebel
JEJS