¿Puedo calentar Trizol?

Me pregunto si puedo calentar el reactivo Trizol durante 30 min 65C. El objetivo es interrumpir el complejo proteína-ARN mientras se inhiben las nucleasas. (No puedo usar RNasin porque está inactivado en 65C, y no puedo usar RVC porque la reacción contiene EDTA). Sé que calentar Trizol no es seguro y sus vapores son peligrosos, pero puedo hacerlo en la campana.

Hasta donde yo sé, Trizol interrumpe los complejos de proteína-ARN por sí solo; verifique el protocolo. Además, el fenol, un componente principal, es inflamable. No sé cuál es el punto de inflamación de Trizol, pero sería extremadamente cuidadoso. Este protocolo afirma que puedes calentarlo. ¿Tu experimento no funciona en RT?
La calefacción no será una buena idea. Pero si sus células son demasiado resistentes a la lisis, puede mantener los tubos en un baño de agua tibia. Sin embargo, llévelo nuevamente a TA antes de agregar cloroformo. Por cierto, ¿qué muestra es esta?
Si le preocupa la seguridad, comuníquese con la oficina de Salud y Seguridad Ambiental de su universidad (o equivalente). Ellos pueden (deberían y lo harán) aconsejarle sobre cuestiones de seguridad.
¿Qué tipo de células o complejos tienes? He trabajado mucho con reactivos a base de fenol pero nunca encontré problemas para trabajar con ellos a temperatura ambiente. Además de eso, el fenol es volátil, especialmente a temperaturas más altas. Tendrá que hacerlo en una buena campana extractora, de lo contrario, se trata de un problema de salud grave. Y definitivamente relájese antes de agregar cloroformo.

Respuestas (1)

Rara vez se trabaja con soluciones fenólicas calientes debido a los peligros de esto. El fenol debe manejarse en la campana extractora de todos modos, a temperaturas más altas se vuelve aún más volátil. Entonces, si planea hacer esto, hágalo con mucho cuidado para evitar lesiones.

Hay un artículo que describe este método para bacterias, pero también debería funcionar para otras muestras: " Evaluación de métodos de aislamiento e integridad del ARN para la cuantificación del ARN bacteriano ". Sin embargo, existe otro método, que fue desarrollado para extraer ARN de material vegetal infectado por bacterias y que también vale la pena probar (aunque podría necesitar alguna adaptación), que funciona sin fenol caliente: "Un método optimizado para la extracción de ARNm bacteriano de raíces de plantas infectadas con Escherichia coli O157:H7" .

Entonces, ¿qué sucede si no mantiene su fenol:cloroformo en la campana extractora? Porque no lo he hecho. ¿Voy a morir? También toco de vez en cuando un gel que contiene etidio. ¿Debería estar escribiendo mi testamento?
Debe tener mucho cuidado con el fenol, ya que causa quemaduras químicas desagradables y duraderas. Básicamente desintegra las células, por eso lo usamos para liberar los ácidos nucleicos. Inhalar es una mala idea. EtBr, por otro lado, debe manejarse con cuidado, pero la mayoría de las guías sobre los peligros están sobrevaloradas. Es mutágeno (puede causar mutaciones) y teratógeno (puede causar daños al embrión en desarrollo) pero aún no he visto ninguna prueba de que sea cancerígeno (excepto cuando causa mutaciones). Esto es diferente para el benceno, por ejemplo, que es directamente cancerígeno.
Además: EtBr tiene una muy buena solubilidad en agua (lo que significa que no atraviesa la barrera de la piel muy fácilmente, especialmente no como una molécula cargada) y es sensible a la luz. Así que úsalo con cuidado, pero no reacciones de forma exagerada.
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