¿Buena técnica de pipeteo?

Una buena técnica de pipeteo es esencial para muchos biólogos, pero puede ser difícil hacerlo bien. Cuando tomo 1 µl de líquido con una micropipeta, parece que siempre tomo menos de 1 µl, y esa cantidad es variable/inconstante. Quisiera saber que puede estar mal.

¿Cuál es la técnica de pipeteo adecuada? ¿Puede ser que la pipeta no sea precisa?

Bienvenido a Biología.SE. Deberías intentar dar más datos sobre el momento en el que te das cuenta de que no has canalizado exactamente un microlitro. ¿Ves directamente en la pipeta que no pipetaste 1 microlitro? O a veces te sobra algo en la pipeta ya veces no. ¿Crees que la pipeta que estás usando podría ser la causa?
No me sorprendería si su pipeta necesita algún servicio. Algunas de las piezas (anillos de goma) que son importantes para el correcto funcionamiento se desgastan y deben reemplazarse de vez en cuando.
Me retracté de mi voto cercano, una buena técnica de pipeteo es esencial en mucha biología. La información general sobre la técnica de pipeteo sería útil.
Esta publicación puede convertirse en una wiki de la comunidad, pero dejaré esa decisión con el OP y @ rg255
¿Qué pipeta usaste? Usar uno de 10 ml no te ayudará. Usa el más pequeño que puedas encontrar. Además, cuando usa una sola pipeta para combinar todas las soluciones y esa pipeta tiene un error sistemático (es decir, se necesita calibración, pero no se hizo), entonces no hay problema, ya que se trata de volúmenes relativos. Si usa varias pipetas para combinar fluidos en una mezcla de reacción, entonces surgen problemas.

Respuestas (2)

He aquí algunos consejos paso a paso sobre una buena técnica de pipeteo:

  1. Asegúrese de que la pipeta esté configurada para el volumen correcto
  2. Asegúrese de que la punta esté firmemente unida
  3. Mantenga la pipeta en posición vertical al pipetear
  4. Lenta y suavemente presione el émbolo hasta el punto correcto (la primera posición de parada)
  5. Inserte la punta en el líquido a pipetear. Asegúrese de que la punta esté correctamente sumergida en el líquido, pero que no toque ni esté cerca de ninguna superficie del recipiente.
  6. Suelte el émbolo lenta y suavemente , manteniendo la pipeta en posición vertical y la punta sumergida, y asegurándose de que no se formen burbujas ; puede intentar humedecer previamente (vea el enlace del video a continuación, alrededor de las 3:00)
  7. Retirar la pipeta del líquido.
  8. Dispense con cuidado el líquido en el recipiente deseado presionando constantemente el émbolo hasta la segunda posición de tope (totalmente presionado), asegurándose de que todo el líquido se dispense sin derrames ni salpicaduras .

"Coloque la punta en un ángulo de 45 grados sobre la pared del recipiente; luego comience a empujar hacia abajo hasta el primer tope; luego empuje hasta el segundo tope; mantenga el émbolo presionado y retire la pipeta y verifique si la gota está en el el recipiente y la punta de la pipeta están vacíos" - Christiaan

  1. Deseche la punta con el émbolo de liberación

Compruebe también que tiene el tamaño/tipo de punta correcto y que está utilizando una pipeta adecuada (p. ej., no utilice una pipeta de 10-100 µl para 120 µl)

Si esto sigue provocando mediciones incorrectas, es posible que deba calibrar su pipeta.

Pruebe una pipeta tomando varias muestras. Si el volumen pipeteado es constante pero incorrecto (p. ej., siempre un 10 % por debajo del objetivo), sugiere que es necesario calibrar la pipeta; es probable que la técnica no sea la incorrecta. Si es inconsistente (tanto por exceso como por defecto), entonces es la técnica o la pipeta (las pipetas defectuosas/dañadas pueden ser inconsistentes, las pipetas mal pero bien calibradas probablemente sean consistentes y solo necesiten calibración).

Intente usar varias pipetas, si todas son consistentes pero hay variaciones entre ellas (la pipeta 1 siempre está por debajo del ~10%, la pipeta 2 siempre está por encima del 15%, la pipeta 3 siempre está por encima del ~2%...) entonces su la técnica es buena y necesitas mejores pipetas. Pida también a un pipeteador experimentado que compruebe su técnica y pruebe las pipetas.

La calibración puede ser realizada internamente por técnicos de laboratorio o por especialistas externos, hable con la persona responsable de su laboratorio.

También vea este video que está bien explicado.

Punto adicional : se debe tener cuidado al pipetear tensioactivos y líquidos viscosos. Los líquidos que contengan tensioactivos deben mezclarse correctamente antes de la dispensación y debe evitarse la mezcla mediante pipeteo justo antes de la dispensación (con la misma punta). Múltiples rondas de pipeteo crean burbujas dentro de la punta y conducen a la recolección de volúmenes más bajos. Los líquidos viscosos se deben pipetear suavemente y se debe tener cuidado de no dejar que el líquido se adhiera al exterior de la punta.
También es una buena idea practicar el pipeteo con diluciones en serie de compuestos coloreados, luego medir la absorbancia de cada uno y trazarla. Si su pendiente está desviada, debe seguir practicando o arreglar sus pipetas.
Ha pasado mucho tiempo desde que sostuve uno, pero ref. paso 8): ¿no debería colocar siempre la punta en un ángulo de 45 grados sobre la pared del recipiente? luego comience a empujar hacia abajo hasta la primera parada; luego empuje hasta la segunda parada; mantenga el émbolo presionado y retire la pipeta y verifique si la gota está en el recipiente y la punta de la pipeta está vacía? Luego, dé unos pequeños golpecitos al recipiente para asegurarse de que la gota esté en el fondo del recipiente.

En primer lugar, debo informar que trabajo para Andrew Alliance , pero respondo con el fin de proporcionar información y no con fines comerciales. Lo que experimenta depende, como medimos con nuestro robot, de la humedad en el ambiente. si tiene 1 nL de agua líquida evaporándose dentro de la punta, debido a que la humedad ambiental es baja, se convertirá en 1 ul de vapor de agua por encima del nivel del líquido, por lo que su muestra descenderá en el equivalente a 1 ul. puede verificar este fenómeno extrayendo la punta del líquido, recuperando la presión del aire y manteniendo la humedad dentro de la punta, y volviendo a aspirar el líquido. En realidad, esta es la razón por la que los laboratorios de calibración trabajan con una humedad ambiental del 70 %...

Interesante detalle, nunca lo había pensado.
¿Buena técnica de pipeteo?
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