Estoy tratando de calcular una cantidad de titulación para una molécula que me gustaría usar en mis muestras de PCR. Las diferentes moléculas tienen diferentes densidades, por lo que me gustaría calcular la densidad adecuada de la molécula valorada. ¿Cuántos microgramos o micromolares de transcriptasa inversa se utilizan en los kits qRT_PCR?
La transcriptasa inversa (y la mayoría de las otras enzimas comerciales en la actualidad) se fabrica de forma recombinante, luego se purifica en diversos grados, utilizando diferentes métodos, entre diferentes proveedores (y, a veces, entre diferentes lotes del mismo proveedor). Algunas enzimas en realidad tienen múltiples unidades funcionales combinadas en un complejo, otras pueden requerir un paso de activación posterior a la traducción como la fosforilación por una quinasa separada para ser completamente funcionales. Todas estas variables pueden producir preparaciones de diferente concentración molar , pero actividad muy similar . Por lo tanto, empresas como New England Biolabs tienen definiciones de unidades para sus diversos productos en función de la actividad.
Habiendo tratado con NEB en el pasado, sé que generalmente también tienen una concentración para sus productos, por lo que si está haciendo experimentos como un ensayo de inhibición de enzimas, puede dosificar tanto la concentración como la actividad. Variará de una enzima a otra si su inhibidor incluso se unirá a cualquier proteína inactiva que pueda estar presente, en cuyo caso la actividad sería el mejor atributo para usar en sus cálculos.
WYSIWYG