Métodos básicos paso a paso para la clase de electroforesis en gel y PCR

He hecho una prueba siguiendo este protocolo al pie de la letra...

PCR paso a paso:

1. Recoja todos los ingredientes (excepto TAQ) del refrigerador y manténgalos frescos (en hielo). Deje el TAQ en el congelador hasta que lo necesite.
2. Haga la mezcla maestra agregando todos los ingredientes (excepto TAQ) usando puntas de pipeta nuevas para cada ingrediente y usando el volumen especificado en la receta de la mezcla de reacción de PCR.
3. Vórtice y gire ligeramente hacia abajo en una centrífuga.
4. Agregue la cantidad requerida de TAQ a la mezcla maestra (insértela en el líquido) y mezcle con la pipeta para extraer un poco de líquido hacia arriba y hacia abajo.
5. Agregue mezclas maestras a tubos de PCR etiquetados en los volúmenes requeridos según lo especificado por el protocolo.
6. Agregue ADN a los tubos de PCR (usando puntas de pipeta nuevas para cada muestra de ADN) nuevamente usando el volumen especificado en el protocolo. Etiquete sus tubos con cuidado (y tanto en la tapa como en el tubo).
7. Gire ligeramente los tubos de PCR en una centrífuga.
8. Ejecute PCR en el termociclador de acuerdo con su protocolo.
9. Recoja las muestras del termociclador y colóquelas en el frigorífico hasta que las necesite.

Electroforesis en gel paso a paso:

1. Hacer 1xTAE (suficiente para hacer el gel de agarosa y colocar en el aparato de electroforesis).
2. Hacer un gel de agarosa (de unos 5 mm de espesor) derritiendo agarosa y 1xTAE en el microondas; Deje que el líquido se enfríe un poco antes de agregarlo al molde.
3. Una vez que el gel esté frío, colóquelo en el aparato de electroforesis, cúbralo con 1xTAE (cubriendo apenas el gel) y luego retire el peine.
4. Recoja los productos de PCR del frigorífico/termociclador.
5. Haga puntos de carga de tinte en parafilm. El tinte de carga está premezclado con GelRed para que sus muestras se muestren bajo la luz ultravioleta.
6. Agregue una muestra a un punto, mézclela aspirando el líquido dentro y fuera de la punta de la pipeta, y luego agréguela con cuidado a un pocillo en el gel de agarosa. Tenga cuidado de no perforar el gel ni derramar líquido fuera de su pozo. Deseche la punta de la pipeta.
7. Repita el paso anterior para cada muestra y para un control negativo (mezcla maestra y agua miliq en lugar de ADN). Utilice una punta nueva para cada muestra.
8. Cargue PCR Ladder, también mezclado con colorante de carga, en un pozo.
9. Conecte el aparato de electroforesis a una fuente de alimentación, con el electrodo negativo (negro) más cercano a los pocillos que contienen las muestras.
10. Configure la alimentación para que funcione entre 80 y 120 voltios.
11. Espere hasta que aparezca un espacio del ancho de un dedo entre las bandas azul y púrpura (aproximadamente 20-30 minutos).
12. Desconecte la alimentación y recoja cuidadosamente el gel del líquido.
13. Lleve el gel a la cámara UV y tome una fotografía. Las moléculas grandes de ADN se mueven más lentamente a través del gel, por lo que estarán más cerca de los pocillos.

Y obtuve un resultado perfecto...

El orden es Control, hembra, macho, hembra, macho, hembra, macho, escalera. Los machos tienen una banda, las hembras dos. El último par no se mostró muy bien en la imagen, pero fue lo suficientemente claro en la pantalla de la sala de cámaras. ¡Gracias a todos por los consejos! Lo siento, la imagen es de baja calidad.

Siéntase libre de recrear estas pautas, ¡pero recuerde dar crédito a la comunidad de Biology Stackexchange!