Estoy usando un ARN que se transcribe in vitro antes de comenzar mi proyecto. Resultó que no está preparado correctamente y tiene contaminación de ADN.
En lugar de volver a realizar la transcripción in vitro, quiero intentar limpiarla con un tratamiento con ADNasa y precipitación con LiCl después. ¿Crees que eso funcionaría?
Y en segundo lugar, el ARN transcrito in vitro está en diferentes diluciones, por lo que tengo un poco de stock (tal vez 5 uL) que es de alrededor de 200 ng/uL y tengo otras diluciones de 1 y 0,1 ng/uL. Me gustaría limpiarlos todos. ¿Crees que si mezclo todas las diluciones con el caldo y determino la concentración y hago el resto? ¿Es apropiado?
¡Gracias!
El tratamiento con ADNasa es en realidad uno de los pasos opcionales si desea deshacerse de la plantilla de ADN original: https://www.neb.com/protocols/2013/04/02/standard-rna-síntesis-e2050
Si sabe que la contaminación ocurrió después de la transcripción, el tratamiento con ADNasa obviamente debería ayudar.
Con respecto a las alícuotas: su stock es 200 veces más concentrado que las alícuotas (por lo que para obtener la misma cantidad de ARN que en 1 µl del stock, necesitaría tomar 200 µl de la alícuota de 1 ng/µl). No creo que valga la pena mezclarlos (y la eficiencia de la precipitación del ARN probablemente disminuirá), de lo contrario, simplemente haga otra transcripción.
golgico
alephreish
golgico