Según tengo entendido, la PCR se puede usar para hacer muchas copias de un gen. Mi pregunta es, ¿es posible secuenciar el ADN después de la PCR? ¿Es más fácil que secuenciarlo mediante otros métodos? Si es posible, ¿cómo lo harías?
Todos los métodos de secuenciación, ya sea la secuenciación clásica de Sanger o la secuenciación de próxima generación (o incluso la tercera generación), necesitan una cierta cantidad de ADN para trabajar.
O necesita extraer ADN de una muestra de tejido grande o necesita amplificar el contenido de ADN de una muestra más pequeña. El primer enfoque a menudo es poco práctico o absolutamente imposible (cuando desea trabajar con células individuales u organismos muy pequeños).
Por lo tanto, la PCR se usa de forma rutinaria para amplificar el ADN antes de la secuenciación. La secuenciación en sí no está influenciada por esto: usas cualquier técnica que sea apropiada. Sin embargo, la PCR puede introducir sesgos en los datos porque no todos los fragmentos de ADN se amplifican con la misma eficacia. Esto debe tenerse en cuenta en el análisis posterior de los datos de secuencia si se requiere información cuantitativa (como en RNA-seq o ChIP-seq).
Volviendo a su pregunta, la PCR no es un método de secuenciación en sí mismo. Simplemente ayuda a obtener la cantidad necesaria de materia prima para que la secuenciación funcione. Además, la mayoría de los métodos de secuenciación también incluyen pasos de PCR, ya que se basan en la generación de fragmentos de ADN superpuestos para unirlos.
Lo hacemos todo el tiempo. Puede usar uno de sus cebadores finales / flanqueantes y usarlo como cebador para la secuenciación. Las empresas suelen tener una configuración en la que pueden tomar una muestra "premezclada".
Dado que tendemos a usar sequetech, aquí están sus detalles: http://www.sequetech.com/requirements.php?premixed=1
Para una segunda opinión, consulte la de Elimbio: http://www.elimbio.com/Sample_Preparation.htm
kmm
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