¿Cuál es la ventaja del ELISA indirecto sobre el directo?

Tiene razón, la ventaja de selectividad de un ELISA indirecto o sándwich proviene del hecho de que se emplean dos anticuerpos: uno para capturar el analito y el otro para detectarlo .

Aquí está la ilustración clásica de cómo funciona este tipo de ELISA. Primero ( [1]), el anticuerpo de captura se recubre sobre la placa y se une a través de uno de varios tipos diferentes de química. Luego se lava la placa (esto ocurre entre todos los pasos). [2], el analito se agrega, a veces en una solución homogénea (es decir, proteína recombinante pura), otras veces en una matriz como suero, lisado celular, etc. El anticuerpo unido a la placa tiene cierta especificidad por el analito, digamos que se une al epítopo incorrecto una vez en 1000. [3]Se agrega el anticuerpo de detección, y digamos que tiene la misma especificidad de 1/1000. Finalmente, [4]se agrega el anticuerpo secundario (con la enzima unida a él) y se agrega [5]el sustrato de la enzima, produciendo el color o la salida de luz.

^{De Wikimedia}

Si usáramos un ELISA directo, la tasa de error sería de 1/1000. Sin embargo, al combinar dos anticuerpos, nuestra tasa de error ahora es 1000 veces menor : 1 en 1 millón. Dado que se requiere que ambos anticuerpos se unan correctamente para obtener una señal, esto hace que los resultados sean mucho más confiables.

A menudo no es necesariamente una pregunta de ventajas frente a desventajas, sino una determinada por los reactivos disponibles y qué pregunta se está haciendo. Por ejemplo, si está desarrollando una prueba para la respuesta de anticuerpos a un antígeno después de la inmunización, probablemente utilice un protocolo como este:

1. recubrir las placas con el antígeno de interés (asumir que bloquear/lavar según corresponda en el futuro)
2. agregar suero diluido de animales/sujetos de prueba

3. agregue un anticuerpo secundario etiquetado específico para este animal/sujeto

   • se debe usar un anticuerpo secundario marcado porque el propio anticuerpo del animal no está (por supuesto) marcado.

si está elaborando su propio anticuerpo marcado en el laboratorio y lo ha hecho antes, puede realizar un ELISA directo e indirecto para verificar que ha marcado el anticuerpo y determinar la calidad del marcado. Suponga que hizo un anticuerpo de ratón biotinilado.

haga un ELISA directo (para cuantificar la etiqueta): 1. cubra con el antígeno objetivo 2. agregue una serie de diluciones de su anticuerpo-biotina 3. agregue estreptavadina-fosfatasa alcalina para detectar

un segundo ELISA indirecto (para cuantificar el anticuerpo): 1. Cubra con el antígeno objetivo 2. Agregue una serie de diluciones de su anticuerpo-biotina 3. Agregue el anticuerpo biotinilado anti-ratón 4. Agregue estreptavadina-fosfatasa alcalina para detectar

Ahora sabe cuánto anticuerpo (del ELISA indirecto) le dará cuánta señal (del ELISA directo) contra cantidades conocidas de su antígeno de recubrimiento.

Una vez que puede tener la opción de realizar un ensayo directo o indirecto es cuando tiene todos los reactivos que necesita, pero necesita amplificar su señal lo suficiente como para detectar cantidades bajas. En ese caso, un ELISA directo solo tiene un valor de etiqueta de anticuerpo, mientras que entrar con una secundaria (por ejemplo, anti-cadena pesada) puede dar como resultado muchos anticuerpos de etiqueta por objetivo.

Thermo tiene una buena página sobre esto.

Estoy de acuerdo con las otras respuestas y la mayor diferencia es, de hecho, la especificidad. Un ELISA indirecto es de hecho más específico, pero también por una razón que aún no se describe aquí: el uso de ELISA indirecto significa que su placa está recubierta con el anticuerpo primario. Dado que este AB primario está unido a la superficie del pocillo con su cadena pesada, las 2 cadenas ligeras (= las partes que se unen a los antígenos, en este caso los AB secundarios) están disponibles para unirse al AB secundario. Esto significa que cada uno de los AB primarios tiene el potencial de unirse a 2 AB secundarios, lo que aumenta considerablemente la señal específica.