¿Se pueden monitorear los experimentos en kits ELISA mediante fluorometría y fotometría?

¿Podemos usar ambos métodos dependiendo de si la enzima marcadora en el anticuerpo recibe un sustrato cromogénico o fluorescente?

Esto es esencialmente correcto.

Puede hacer que el mismo ELISA funcione en diferentes métodos de detección. El ELISA más común es colorimétrico y funciona uniendo un anticuerpo secundario conjugado con alguna enzima a su anticuerpo primario. Las plataformas ELISA fluorescentes están menos extendidas, pero solo porque el ELISA colorimétrico tiene reputación de ser el "estándar de oro".

La peroxidasa de rábano picante (hrp) es un sistema conjugado común que se utiliza en ELISA tipo sándwich y, al agregar solución de TMB a los pocillos de reacción, la reacción resultante produce una diimina que vuelve azul el líquido del pocillo, y lo hace en proporción a la cantidad de analito. capturado. Detiene la reacción agregando un ácido, que vuelve amarillo el pocillo, y lee el OD a 450 nm (también recomiendan restar el OD a 510 nm para tener en cuenta la dispersión de luz de la microplaca).

Figura 1. Ensayos Quantikine de R&D Systems, detección de HRP-estreptavidina. https://www.rndsystems.com/products/quantikine-hs-colorimetric-sandwich-elisas-high-sensitivity

Por otro lado, sabemos que también podemos conjugar el anticuerpo con una molécula fluorescente si quisiéramos, como FITC o PE. Todo lo que necesitamos hacer es excitar la molécula con una fuente de luz o láser apropiado para obtener una emisión fluorescente y leer con un sistema apropiado para leer esas señales. La intensidad de la fluorescencia sería entonces proporcional al analito capturado, basándose en una curva estándar como cualquier ELISA.

Entonces, la verdadera respuesta es que podemos usar uno, el otro o ambos, pero no al mismo tiempo.

Solo tenga en cuenta que las diferentes plataformas pueden producir resultados diferentes, por lo que debe validar sus dos plataformas y correlacionarlas para garantizar la reproducibilidad. Sin embargo, la mayoría de los laboratorios simplemente intentan quedarse con uno u otro.