Al ejecutar geles, ¿cuál es la diferencia entre voltios constantes o amperios constantes?

En general, desea ser coherente con la ejecución de sus geles a voltios constantes o amperios constantes. Sin embargo, está muy claro que durante la progresión de los geles de agarosa y PAGE, el parámetro libre cambia debido al cambio en la resistencia del gel.

Si bien existen razones de seguridad por las que ejecuta uno frente al otro, tengo curiosidad por saber cómo estas diferencias afectan la migración de su gel.

Respuestas (1)

Responderé solo para SDS-Page , que es el sistema con el que estoy más familiarizado.

Con un sistema tampón discontinuo, como el conocido sistema Laemmli , la resistencia aumenta durante la electroforesis, ya que los iones de cloruro (muy móviles) son reemplazados por glicinato (iones de glicina).

De la ley de Ohm :

Voltaje (V) = Corriente (I) x Resistencia (R)

y la definición de potencia (vatios):

Vatios (W) = Corriente (I) x Voltaje (V) = I 2 x R

  • A corriente constante , la electroforesis procederá a un ritmo uniforme, sin embargo, a medida que aumenta la resistencia, también lo hará el voltaje y la cantidad de calor generado.

    En algunos sistemas tampón discontinuos, como el sistema Tricine/SDS de Schägger & von Jagow , ¡esto puede ser suficiente para romper las placas de gel!
  • A voltaje constante , la corriente disminuirá durante la electroforesis; como resultado, se generará menos calor que la electroforesis de corriente constante , pero la tasa de migración de la muestra disminuirá con la disminución de la corriente .

Referencias

Laemmli, Reino Unido (1970) Escisión de proteínas estructurales durante el ensamblaje de la cabeza del bacteriófago T4. Naturaleza 227 , 680-685. [ PubMed ]

Schägger, H. y von Jagow, G (1987). Electroforesis en gel de tricina-dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida para la separación de proteínas en el rango de 1 a 100 kDa. Anal Biochem 166 , 368-379. [ PubMed ]