¿Qué son las imágenes de dos fotones de calcio?

¿Qué significa "dos fotones"?

La microscopía confocal ordinaria utiliza un solo fotón de luz láser para excitar la molécula de colorante fluorescente.

En la microscopía de dos fotones, se utilizan dos fotones, con menor energía, que no pueden excitar la molécula de colorante por sí mismos, pero su interferencia en un lugar específico lleva a la suma de sus energías ya la excitación.

Esto tiene beneficios tales como una menor fototoxicidad y una mayor precisión (resolución), especialmente en el plano z.

¿Cómo es el implemento? ¿Todas las neuronas relevantes (diseñadas genéticamente) se iluminan en el mismo color?

Hay dos tipos de tintes fluorescentes para la imaginación de Ca2+ de 2 fotones. Dado que desea medir la concentración local de Ca2+, puede utilizar un producto químico que quelate los iones de calcio y cambie su conformación y propiedades fluorescentes basándose en eso, por ejemplo, fura-2.

Como alternativa, puede preparar proteínas fusionadas a partir de calmodulina (proteína MODULADA EN CALcio) y alguna proteína fluorescente, por ejemplo, GFP, y transfectar las células con este producto.

Esto significa que puede transfectar diferentes células con diferentes GFP y obtener diferentes colores. Depende del diseño del experimento real.

Fuente

¿Es el color lo que se mide o la intensidad del color? ¿Es sensible al voltaje absoluto oa los cambios de voltaje?

Puede analizar los cambios de intensidad de fluorescencia. Las intensidades y proporciones de fluorescencia derivadas se representan frente a valores calibrados para niveles conocidos de Ca2+ para conocer la concentración real de Ca2+. Fuente

¿El propósito de esta técnica es neuronas individuales o caminos cerebrales?

En realidad, con una buena interpretación de los datos se puede utilizar para el análisis de ambos.

Para obtener más información sobre imágenes de calcio, consulte, por ejemplo: http://www.cell.com/neuron/fulltext/S0896-6273(12)00172-9 o http://www.pnas.org/content/100/12 /7319.completo

o artículos wiki correspondientes: https://en.wikipedia.org/wiki/Two-photon_excitation_microscopy https://en.wikipedia.org/wiki/Calcium_imaging