¿Cómo se preparan las concentraciones en forma de masa/volumen (peso/volumen) para sustancias como los ácidos nucleicos o, en este caso, la proteinasa? Un ejemplo detallado sería útil.
Necesito preparar un tampón de aplastamiento para un ejercicio de extracción de ADN/PCR que me ayude a aprender mejor los materiales para una "pasantía" en clase.
La receta de tampón aplastante que encontré en un manual de clase de laboratorio lo describe como: 10 mM de Tris-Cl, pH 8.2, 1 mM de EDTA, 25 mM de NaCl y 200 µg/ml de proteinasa K (recién diluida).
Entiendo las concentraciones de molaridad lo suficientemente bien. Solo hay que determinar la masa molar total de una sustancia, en este caso NaCl, y con esa masa molar (g/mol) entonces usar la molaridad deseada dada (en este caso 25 mM de NaCl, que equivale a 0,025 mol/un litro). ) para obtener el número de gramos de la sustancia necesaria. En este caso, dado que necesitamos 0,025 moles/1 litro, tendríamos que multiplicar eso por la masa molar para obtener: (g/mol) X (mol/l) = g/l de NaCl.
También entiendo las soluciones porcentuales (hasta cierto punto). Si necesitara gel de agrosa al 1%, tomaría 1 gramo de polvo sólido de agarosa y lo llevaría a 100 ml en total para obtener un 1%, ya sea usando agua o tampón.
Tengo problemas para entender los conceptos de concentración, en referencia a mg/ml.
Por lo que entiendo, µg/ml es un tipo de concentración de peso (masa)/volumen. Por tanto, si se diera el caso de que quisiera preparar 200 µg/ml de proteinasa (recién diluida), ¿cómo lo haría? ¿Agregaría 5 ml de agua desionizada para obtener un volumen de trabajo de 1000 µg de proteinasa por 5 ml de agua, lo que sería equivalente a 1 mg de proteinasa por 5 ml de agua? De ese 1 mg de proteinasa a 5 ml de agua, ¿debo extraer 0,2 µl (o 200 ml) de solución para tener los 200 µg/ml? ¿O estoy totalmente equivocado? Intenté buscar en Google para obtener más información, pero me confundía cada vez más.
Depende de en qué forma se encuentre su proteinasa K.
Puede tener una solución madre de cierta concentración, en cuyo caso simplemente agrega un volumen específico de acuerdo con .
Ejemplo: Digamos que quieres preparar 5 mL ( ) de 200 µg/mL ( ) proteinasa K de un stock de 1000 µg/mL ( ). Está buscando el volumen de solución madre para agregar ( ).
Así que toma 1 ml del caldo y lo lleva a 5 ml.
O puede tener un polvo liofilizado. En este caso, tienes dos opciones:
1) Puede hacer una solución madre del polvo y, de nuevo, usar . Esto tiene la ventaja de no tener que pesar el polvo cada vez que necesite usarlo. Sin embargo, esta puede no ser una opción viable, ya que no estoy seguro de la estabilidad de la proteinasa K en solución.
2) Puede pesar la cantidad que le dará la concentración deseada (que depende del volumen de tampón que esté haciendo).
Ejemplo: Nuevamente, desea preparar 5 mL de 200 µg/mL de proteinasa K. La masa total que necesita es:
Así que pesa un miligramo y llévalo a 5 mL.
No hay nada especial en la concentración de masas; puede convertirlo a molaridad dado el peso molecular de la proteinasa K. Según Wikipedia , la proteinasa K es 28,9 kDa o 28900 g/mol. Sin embargo, si está haciendo esta conversión, asegúrese de encontrar el peso molecular real de la proteína que está usando. 200 µg/mL es igual a:
marzo ho
Ro Siv
Ro Siv
marzo ho
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