Durante la electroporación de células bacterianas (trabajo con Mycobacterium tuberculosis , pero creo que esto también se aplica a E. coli ), a veces se producen chispas. He leído que esto se debe a las sales presentes, ya sea en la muestra de ADN o en la bacteria.
Utilizo el kit de preparación de plásmidos de Qiagen, que incluye EB (tampón de elución). Este contiene Tris-Cl. ¿Podría esto estar contribuyendo a la chispa? ¿Puedes explicar cómo funciona esto? ¿La elución con agua en lugar de EB reduce las posibilidades de chispas?
En mi experiencia, el tampón de elución no importa (tanto para E.coli como para micobacterias). He escuchado esto antes de compañeros de trabajo, pero generalmente se basa en supersticiones o evidencia anecdótica. He comparado la elución con agua/EB y nunca vi una diferencia en la generación de chispas (de hecho, generalmente obtengo un poco más de colonias con EB).
Cuando obtengo arcos (chispas), generalmente es porque no lavé lo suficiente, tengo burbujas o tengo demasiadas bacterias. El arco es un colapso de la resistencia.
Las chispas se producen por tener demasiadas sales o posiblemente por una solución insuficiente. Después de afinar mi electroporación para cantidades muy altas de ADN (más de 16 ug), lo que encontré para ayudar es:
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