El plásmido pET se utiliza para la expresión de proteínas con el promotor T7 en cepas de expresión, como E.coli BL21(DE3)
Contiene un gen lacI que codifica la proteína represora lac, una proteína de interés bajo el control de un promotor T7 para la ARN polimerasa T7 y un operador lac que puede bloquear la transcripción, directamente detrás del promotor. El operón lac es otro control de la transcripción de la proteína de interés.
Además, la polimerasa T7 también se encuentra en el genoma bajo el control del operón lac.
Cuando se añade IPTG, se inactiva el represor lac -> T7 polimerasa y por tanto se expresará la proteína de interés.
El gen Lac I ya está presente en el genoma de la cepa de expresión utilizada, ¿por qué también se clona en los vectores pET?
Según este artículo , una única copia del gen lacI da lugar a unas 10 copias de la proteína lacI por célula, y podemos concluir, por tanto, que esta es la cantidad necesaria para mantener reprimido un único operón lac . El artículo también menciona la mutación lacI Q en el promotor de lacI que da como resultado un aumento de diez veces en el nivel de proteína lacI.
Si una construcción de expresión de lac está presente en más de 100 copias por célula, el resultado será una represión con fugas, y esto puede resultar en la selección de mutaciones en el gen de interés si tiene efectos nocivos en la bacteria huésped. La forma más sencilla de solucionar este problema es colocar un gen lacI (o lacI Q ) en el plásmido de expresión para que los niveles del represor sean proporcionales al número de copias del operador lac , como en los vectores pET.
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