¿Cómo puedo mejorar mis rendimientos de extracción de gel? Utilizamos el protocolo estándar de Qiagen, extracción en gel, disolución en tampón QG a 42 °C y purificación mediante columnas de intercambio aniónico. Sin embargo, con 500 ng finalmente obtenemos 100 ng para un rendimiento del 20%. Tenía curiosidad por saber qué más se ha probado para la extracción de gel.
También agregamos IPA y NaOAc a la mezcla disuelta antes de la purificación en columna.
Cuando optimicé la extracción de gel en mis manos, dos factores resultaron ser críticos para maximizar el rendimiento de la extracción de gel:
El pH de la solución de elución. Inicialmente, solía eluir el producto final con agua tratada con DEPC, pero el rendimiento variaba mucho a medida que cambiaba el pH del agua. Usar tampón EB es mejor, ya que mantiene un pH estable de 8.
Lo más importante es * incubar la solución de elución con la columna el mayor tiempo posible (y también eluir dos veces). * Incubo por unos 10 min, que es más de lo que recomiendan pero funciona mucho mejor.
Intenta disolver a 50C. En el kit de extracción de gel de Qiagen, dice que se disuelva a 50C o hasta que se disuelva por completo.
El tamaño del gel también es importante. Asegúrese de que sea del 1,5 % o menos, y que el tamaño del gel sea inferior a 400 mg.
Además, presta atención al primer paso. Si el líquido no tiene el mismo color que el primer tampón QG, entonces hay un problema de pH.
Eluir de la columna con tampón de elución precalentado a 50-60 grados. Meto el mío en la incubadora durante la extracción para que esté tibio cuando llegue a eluir. Parece ayudar a rendir.
drosófila