Si hipotéticamente hago una versión inactiva de Cas9 o ZFN (que se unirá al ADN pero no aplica la reacción de escisión). ¿Qué pasará después de que la proteína se una al ADN? ¿Se quedará ahí para siempre e interrumpirá el proceso de transcripción/traducción? ¿O será auto-desatado después de un tiempo?
Todas las reacciones de unión son reversibles. La unión y la desunión (asociación y disociación) suelen estar en equilibrio. La cantidad de proteína que se une al ADN y el tiempo que pasa una sola molécula en el estado unido depende de los parámetros cinéticos. En el caso de la Cas no catalítica , la proteína puede inhibir la transcripción si se une al promotor. De hecho, estas variantes inactivas se han desarrollado y utilizado para la inhibición dirigida de la transcripción ( Himeda et al., 2015 ).
Si CRISPR-Cas bloquea un sitio de unión para un activador transcripcional, entonces el grado de inhibición dependería de la competencia entre el activador y el inhibidor de CRISPR-Cas por los sitios de unión. Esta competencia dependería de los parámetros cinéticos así como de la concentración de las especies competidoras.
De manera similar, puede diseñar proteínas/ARN que puedan unirse a ARNm (en RBS en procariotas o secuencias de Kozak en eucariotas) e inhibir la traducción.
Otro dato interesante: el sistema CRISPR-Cas ha sido diseñado para funcionar también como activador transcripcional ( Didovyk et al., 2016 ).
siempre confundido