¿Existe un protocolo para congelar y descongelar células de Bacillus subtilis?

Hay un libro que dice almacenar esporas de Bacillus en glicerol al 50% a -70 grados centígrados (no menciona si el 50% es la concentración final o no). Pero por lo que sé, las propias células se pueden almacenar en cualquier % de glicerol siempre que la concentración final de glicerol sea del 15 % (v/v) a -80 grados centígrados.

¿Hay alguna diferencia entre conservar esporas y células? Porque el libro decía conservar las células a cierta concentración de glicerol y las esporas a otra concentración de glicerol.

Además, supongamos que raspo un poco de B. subtilis del criovial para reutilizarlo y se congelan. ¿Espero a que las células raspadas se descongelen y luego las coloque en placas, o las coloque en placas mientras aún están congeladas?

Y si quiero esporular estas células, ¿debo recuperar estas células congeladas sembrándolas e incubando durante la noche, o puedo dejarlas caer directamente en el medio de esporulación? Quiero obtener los detalles correctamente.

¡Bienvenidos a Biología! Desea almacenar B stutilis y poder volver a cultivarlos más tarde, o ¿con qué propósito hace esta pregunta? Además, ¿por qué cree que un procedimiento estándar de almacenamiento de glicerol para E. coli no funcionará para usted? La información de fondo ayuda a la gente a responder a su pregunta.
Le aconsejo que edite su pregunta original y agregue estos detalles
Gracias por las ediciones. Acabo de agregar algunos espacios aquí y allá.
Esto es solo anecdótico y no conozco el mejor método, pero solía almacenar células de B. subtilis en glicerol al 50 % a -80 °C. Para la producción de proteínas, descongelaría el stock por completo, las colocaría en placas para obtener células en fase logarítmica y luego inocularía el medio de cultivo. Trabajó cada vez.

Respuestas (1)

Si bien nunca he realizado cultivos de stock bacterianos a partir de esporas, no creo que sea necesario, ya que el procedimiento estándar para hacer stocks bacterianos debería funcionar sin problemas.

Para eso, cultiva sus bacterias en cultivo líquido hasta llegar a la fase logarítmica tardía (por lo que tiene muchas bacterias en sus medios), tome 1 ml del cultivo, mézclelo con 100% de glicerol para alcanzar una concentración final de glicerol de 50 % y luego congelarlo a -80°C. En esto, puede almacenarlo durante mucho tiempo (probablemente no indefinidamente, pero es posible durante años).

Cuando desee revivir sus cultivos, tome el tubo y use un asa de inoculación o una punta de pipeta para raspar un poco del cultivo congelado y colóquelo en una placa de agar adecuada. Si desea aumentar la escala, elija una colonia de la placa en medios líquidos.

Dado que el glicerol es un dolor para la pipeta (y también puede tener problemas de esterilidad), también he cambiado a DMSO como un agente crioprotector para cultivos bacterianos. Simplemente agregue 15% (concentración final) de DMSO en los viales criogénicos (es decir, 150 ul de DMSO por 850 de cultivo), mezcle y luego congele las células. En mi experiencia, esto funciona tan bien como el glicerol.

+1 - solo por curiosidad filosófica, dices Cuando quieras revivir tus culturas ; ¿Considera que sus células están muertas a -80°C?
Al menos no están creciendo y haciendo metabolismo. Yo diría que muerto, en reposo encaja probablemente mejor.
¿Existe un protocolo para congelar y descongelar células de Bacillus subtilis?
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