¿Cómo se puede identificar si una persona es homocigota para un determinado alelo?

He estado pensando en iniciar un pequeño proyecto de investigación privado. En este proyecto necesito averiguar si una persona es homocigota para un determinado alelo. La razón de esto es que realmente estoy tratando de averiguar si tiene una mutación que le impide producir esta quimiocina. Por lo tanto, necesito identificar de una manera fácil qué personas son "normales", qué personas tienen la mutación en un cromosoma y qué personas tienen la mutación en ambos. Alrededor del 1% de la población tiene la mutación en ambos cromosomas.

Una cartilla AFAIK no sería capaz de diferenciar entre las personas heterocigotas y las "normales".

¿Alguien sabe cómo abordar esto?

podrías usar un cruce de prueba, pero eso podría complicarse :)
No creo que tenga tiempo para criar humanos ;)

Respuestas (1)

Podría usar una estrategia de 3 cebadores, donde tiene un cebador común, uno que solo amplifica el alelo mutante y otro que solo amplifica el wt. Esto puede o no ser factible dependiendo del tipo de mutación. El ADN de las personas het amplificará ambos productos, mientras que los homocigotos solo amplificarán uno (wt o mutante).

Por supuesto, vincular la mutación de un gen con la falta de una quimiocina no es necesariamente sencillo.

Sin embargo, para ser honesto, usaría un enfoque diferente: tome a las personas que no producen la quimiocina y a las personas que sí lo hacen (simplemente dosificando la quimiocina en la sangre). Ahora secuencia el gen en los dos grupos y busca mutaciones.

Sí, ese es un enfoque inteligente. Pero no creo (= no sé si) el gen no funcional tendrá el mismo aspecto en todos los individuos. Dado que es una mutación missense/nonsense, probablemente no tenga una característica clara. De todos modos, ¡buen punto! +1
@Pedery: bueno, entonces, ¿la secuenciación no sería la mejor estrategia en ese caso? ¿Tiene alguna información sobre la mutación o su producto?
No en este momento. En este momento estoy tratando de obtener una visión general. La secuenciación realmente no sería una opción porque quiero convertir esto en un kit de prueba súper fácil, uno que no necesite maquinaria costosa y obtenga un resultado de prueba de una simple gota de sangre. Pero de hecho, su respuesta fue útil. Si no obtengo mejores respuestas, marcaré la tuya como aceptada.
Por cierto, ¿cuál sería el propósito de la cartilla común? Si tiene los otros dos cebadores, aún le darán toda la información que necesita, ¿verdad?
No, necesitas dos cebadores para hacer una amplificación por PCR. Si solo tiene un cebador que va en el alelo mutante y uno que va en el wt, no tendrá forma de amplificar nada, ya que los dos nunca se unirán al mismo ADN.
Lo tengo. Estaba pensando en conjuntos de dos cebadores por alelo como un cebador.
¿Cómo se puede identificar si una persona es homocigota para un determinado alelo?
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