Los proveedores comerciales de anticuerpos primarios para objetivos proteicos determinados suelen enumerar las aplicaciones recomendadas, para las cuales se ha demostrado que el anticuerpo funciona. Por lo general, busco usarlos para inmunofluorescencia, y mi impresión (que ciertamente puede estar basada en una muestra no representativa) es que la mayoría de los anticuerpos se recomiendan solo para usar con Western Blot.
¿Por qué es esto? ¿Es WB la aplicación más común? ¿La más general? ¿Es más fácil de probar que IF?
Y, quizás más al grano, ¿qué tan en serio se deben tomar estas recomendaciones? Si no se recomienda un anticuerpo para la FI, ¿significa eso que probablemente no funcionará? ¿O que bien puede, pero nadie se ha molestado en comprobarlo? ¿O que es casi seguro que lo hará?
¿Quizás WB es más fácil de probar para ellos?
En general, sin embargo, mi recomendación es verificar si proporcionan referencias al papel usando esos anticuerpos y mirar las imágenes en el papel.
Tenga cuidado al confiar en las imágenes del proveedor, obviamente he visto imágenes retocadas con Photoshop en sitios web comerciales. Además, siempre verifique dos veces los documentos de referencia, ya que a veces realmente no usan el mismo producto que se vende...
Aparte de eso, en mi experiencia, la aplicación recomendada es solo eso: recomendada. El anticuerpo también puede funcionar para otra aplicación. Dicho esto, tenga en cuenta que existe una justificación para que un anticuerpo funcione para WB y no para IHC, por ejemplo: la perfusión con fijadores como PFA cambiará la estructura 3D de la proteína objetivo y puede enmascarar (o revelar) ciertos epítopos, por lo que el anticuerpo puede ser más o menos eficiente según la forma de la proteína con la que esté tratando (nativa, fijada en PFA, fijada en glutaraldehído, desnaturalizada con SDS, etc.)
Los anticuerpos para WB y para IF tienen requisitos fundamentalmente diferentes para la estructura del epítopo. Los anticuerpos para WB reconocen estructuras desnaturalizadas extendidas por tratamiento con SDS. Los anticuerpos para IF a menudo necesitarán reconocer una estructura similar a la nativa.
Dependiendo del proveedor, algunos tendrán muchos anticuerpos para IF. Sugiero mirar alrededor un poco más.