Estoy planeando pedir oligo, polimerasa, nucleótido, tampón para mi primer experimento de PCR (ahora no tengo nada), así que tengo algunas preguntas.
¿Cómo y cuánto tiempo puedo almacenarlos? Solo tengo una nevera que puede congelar a -10 -> -20C.
Veo que el tamaño/concentración de polimerasa es de 400 unidades y 25 nmoles de oligo. Entonces, ¿qué puedo hacer con 25 nmoles de oligo y 400 unidades de polimerasa? ¿Cuántos experimentos de PCR puedo hacer con 400 unidades de polimerasa y cuántos experimentos de PCR puedo hacer con 25 nmol de oligo?
Si tengo una máquina de HPLC, ¿puedo reutilizar la polimerasa purificándola después de la reacción?
Los fabricantes de cada componente deben tener información disponible en su sitio web sobre las temperaturas de almacenamiento, junto con los protocolos recomendados sobre la cantidad de cada componente que se debe agregar a la reacción de PCR. No intentaría reutilizar la polimerasa, ya que dependiendo del tipo que compre, puede ser un complejo de proteínas y puede no ser funcional después de la purificación. Sin embargo, puedes experimentar todo lo que quieras, ¡son tus cosas!
1: -20 es la condición de almacenamiento normal para los reactivos de PCR en el laboratorio, por lo que debería estar bien. Una advertencia: debe asegurarse de que su congelador NO se esté descongelando automáticamente. La mayoría de los congeladores de consumo alternarán la temperatura para evitar la acumulación de escarcha. Esto es muy malo para las enzimas y reducirá en gran medida su vida útil. Si no puede encontrar un congelador que no descongele, podría estar bien si amortigua la temperatura manteniendo su enzima en un enfriador en el congelador, o dentro de un bloque de metal con un agujero perforado.
2: Puede estirar sus reactivos bajando el volumen de cada reacción de PCR. 25uL es factible en el laboratorio, pero tenga en cuenta que cuanto menor sea el volumen, mayor será el error relativo en sus mediciones.
3: Me parece extraño que tenga acceso a una máquina de HPLC pero no pueda permitirse comprar una nueva enzima cuando se le acaba. Realmente no intentaría reutilizar nada. Tal vez podría funcionar, pero ¿realmente confiaría en sus resultados? Si compra, puede encontrar marcas más baratas de polimerasa.
¡Buena suerte!
pitido