¿Técnica de amplificación para proteínas similar a PCR para ADN?

Sé que la PCR se puede usar para amplificar una pequeña muestra de ADN para realizar experimentos. ¿Existe una técnica similar para usar en una muestra de proteína? Más específicamente, no estoy interesado en "cortar" la proteína sino simplemente hacer más de la muestra original.

No se pueden amplificar las proteínas. Solo tienes que expresar más y/o depurar mejor.
Puede usar kits de traducción in vitro, pero requieren ARNm como plantilla y la amplificación no es exponencial como en la PCR. No existe un mecanismo biológico para sintetizar proteínas usándose a sí mismas como plantilla. Esto es diferente al ADN y al ARN.
La PCR aprovecha el mecanismo de la polimerasa, que puede generar más ácido nucleico a partir de una plantilla de ácido nucleico. No existe tal mecanismo por el cual se pueda producir proteína a partir de una lectura de proteína, ya que en realidad es el ribosoma el que produce proteína a partir de una plantilla de ácido nucleico, ¿verdad? Como señala canadianer, ¡solo puede esperar expresar más y purificarlo muy bien!
Extraiga el gen, cree un ADNc y clonelo en un vector de expresión inducible de alto número de copias. Transforme bacterias o levaduras y haga crecer un cultivo bajo selección. Déjelos crecer a 10^10 o más, luego induzca la expresión. Purifica montones y montones de proteínas. Si no puede obtener el gen, entonces podría emprender la muy difícil tarea de secuenciar la proteína completa. Luego, crea un ADNc sintético a partir de la secuencia y lo usa en su vector de expresión. No puedes eludir el Dogma Central; ADN<->ARN->Proteína

Respuestas (3)

No hay ninguna técnica con una excepción. PCR genera ADN a partir de ADN para que puedas establecer ciclos. Para la síntesis de proteínas, un ARNm es una plantilla para producir proteínas. Lo más probable es que las proteínas que le interesen no sinteticen ARNm, por lo que no puede establecer ciclos.

La excepción que dije antes es la amplificación cíclica de plegamiento incorrecto de proteínas (PMCA) . Algunas proteínas mal plegadas asociadas a enfermedades pueden inducir el mal plegamiento del mismo polipéptido que no está mal plegado. Así se pueden establecer ciclos de reacción de plegado erróneo.

PD:

Existen técnicas para sintetizar proteínas a partir de ADN o ARN, pero no son reacciones en cadena. https://www.promega.com/products/protein-expression/eukaryotic-cell-free-protein-expression/ https://www.neb.com/products/e6800-purexpress-invitro-protein-lysis-kit

Es imposible amplificar proteínas como la PCR. El ADN y el ARN pueden someterse a PCR porque los pares de bases son complementarios: AT CG AU. Pero los aminoácidos no son complementarios; ¿Puedes encontrar un aminoácido que coincida con la glicina? Además, las proteínas no son solo una cadena polipeptídica única como el ADN, las proteínas deben plegarse después de sintetizar la cadena polipeptídica. Por lo general, una molécula de proteína necesita más de una cadena polipeptídica para combinarse y formar una molécula de proteína. No puede ocurrir que funcione como PCR.

Diría que imposible es una exageración. Un bioquímico ingenioso podría crear moléculas que sean "complementarias" para cada aminoácido similar a una polimerasa de ADN. Entonces se necesitaría una proteína para detectar y traducir esta similitud en elongación de la proteína. Improbable, diablos sí, imposible, no.

-1. Literalmente, no existe ningún mecanismo conocido a través del cual esto pueda llevarse a cabo. El diseño de proteínas funcionales de novo está fuera del alcance de la bioquímica moderna.
Incluso si tiene éxito en ese proceso, la proteína sigue siendo lineal o peor.
Existen múltiples mecanismos para probar esta metodología. ¿Por qué alguien iniciaría este proceso de novo? La evolución tanto en la naturaleza como en el laboratorio comienza a partir de una plantilla preexistente. Y todas las proteínas son lineales para empezar.
¿Técnica de amplificación para proteínas similar a PCR para ADN?
RespuestasAquíPolítica de privacidad1y, 0v