Lecturas UV-Vis de 205 nm

Por lo general, determinamos la concentración de proteínas utilizando una lectura de 280 nm. Sin embargo, es razonable usar 205 nm. Tenía curiosidad acerca de la eficacia de este método.

¿Qué evidencia tiene para la razonabilidad de leer en 205?
@MattDMo: Supongo que se debe a que, por lo general, los ácidos nucleicos se miden en 260. Sin embargo, no estoy seguro de que 205 elimine el ruido de fondo del ADN... De todos modos, estas son cuantificaciones muy aproximadas y solo dan una idea general de la concentración de proteínas.
@MattDMo, no quería dirigir la pregunta, pero estaba revisando este documento. Hay una base científica para la pregunta. onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/pro.2253/abstract

Respuestas (1)

Esto puede ser lo que estás buscando. La fórmula de conversión es:

Concentración de proteína (mg/ml) = ( Absorbancia a 205 nm ) 31

El primero, Scopes , indica que los contaminantes de ácido nucleico confundirán las lecturas de absorbancia de 205 nm. Parece que este cálculo espectrofotomético es factible para especies de proteínas relativamente puras.

La absorbancia del ADN parece ser tan alta en 205 como en 260.facllet.evansville.edu/be6/b4454/DNAspectrum.gif?dur=2225
Parece que tienes razón. Lo que no se muestra es la absorbancia relativa de la proteína y el ácido nucleico a 205 nm. NB: no he seguido con las dos referencias vinculadas desde esa página que publiqué.
Quería enfatizar que A280nm es más sensible, ya que la absorbancia del triptófano es más alta. Para que pueda detectar las concentraciones más pequeñas con A280nm. Para proteínas con pocos o ningún aromático, o para proteínas con composiciones atípicas (y coeficientes de absorción desconocidos), el enlace peptídico de absorbancia por unidad es más general. (Eso es lo que está investigando A205nm). Pero como han dicho otros, los ácidos nucleicos contaminantes también se absorberán en esa longitud de onda.
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