explicación del experimento de conjugación en bacterias

Hay tres variables que se muestran aquí:

1. La cantidad de tiempo que las muestras se almacenaron en el congelador para permitir$^{32}$Decaimiento de P (eje x),
2. La cantidad de tiempo que se permitió que las muestras crecieran en un entorno no radiactivo antes de congelarse (puntos con diferentes símbolos), y
3. La tasa de$\beta$-producción de galactosidasa cuando las células se descongelaron y se cultivaron en presencia del inductor transcripcional IPTG (eje y).

Vamos a desglosarlos un poco más:

El eje x mide "fracción de$^{32}$decaimiento de P". En términos del protocolo experimental, esto se traduce como "período de tiempo que queda en el congelador".$^{32}$Experimentos de descomposición de P, las muestras se almacenan en el congelador durante varios períodos de tiempo, donde los procesos metabólicos, como la replicación del ADN o la producción de enzimas, se interrumpen o se ralentizan drásticamente. Aunque el metabolismo se ha cerrado,$^{32}$P todavía puede decaer en beta$^{31}$S (según Wikipedia ), que promueve la descomposición de cualquier ADN que contenga (anteriormente) isótopos radiactivos. La implicación es que cuanto más tiempo deje las muestras en el congelador, más$^{32}$P decaerá y el ADN más radiactivo se degradará. Entonces puede leer la tendencia en el eje x como "fracción creciente de$^{32}$P decaimiento", "cantidad creciente de tiempo que queda en el congelador" o "fracción decreciente de intacto$z^+$ADN." Los diferentes puntos correspondientes a, digamos, "48 minutos después del apareamiento" corresponden a muestras que se congelaron 48 minutos después del apareamiento pero se mantuvieron en el congelador durante diferentes períodos de tiempo.

El eje y mide el "porcentaje de supervivencia de la capacidad de formación de enzimas". Creo que es seguro interpretar esto como la tasa de$\beta$-producción de galactosidasa relativa a la tasa sin$^{32}$P-decaimiento. En otras palabras, si trazas$\beta$-producción de galactosidasa a lo largo del tiempo (como en la Figura 5) para diferentes condiciones, medirá una pendiente, la tasa de producción de enzimas. Si normaliza todas estas tasas de diferentes condiciones por la tasa cuando no había radiactividad (y por lo tanto no había degradación de$z^+$ADN en el congelador), obtendrá los valores trazados en el eje y.

La interpretación final de esta trama es que el$\beta$-la tasa de producción de galactosidasa es sensible a la pérdida de la introducida$z^+$ADN cuando la pérdida ocurre poco después del apareamiento, pero si se permite que las células crezcan lo suficiente como para dividirse una o dos veces antes de la degradación del ADN, entonces la pérdida del conjugado original$z^+$El ADN no afecta a la$\beta$-velocidad de producción de galactosidasa. Estos datos son consistentes con la idea de que la forma de ADN de un gen se requiere constantemente para$\beta$-producción de galactosidasa, y después de varias rondas de división el$z^+$El ADN se ha replicado y ya no es radiactivo y propenso a la degradación.

Hay muchos datos en esta trama (¡ah, la elegancia de la biología molecular de la década de 1960!) por lo que puede llevar un tiempo digerirla. ¡Espero que esto ayude!