¿Los términos ensayos de expresión génica y ensayos de expresión de proteínas se usan indistintamente en biología molecular? ¿O se espera de usted que diferencie entre los dos términos?
Por ejemplo, si reemplazo la secuencia de ADN de un gen de interés con el ADN de GFP; y luego cuantificar los niveles de fluorescencia, ¿estoy midiendo la expresión génica del gen de interés O la expresión de la proteína?
La expresión génica es la producción de un producto génico funcional a partir de un gen. Por lo tanto, la expresión de proteínas es una lectura funcional de la expresión de genes para loci de genes que codifican proteínas.
Sin embargo, la expresión génica se utiliza con frecuencia y de forma errónea para referirse a las medidas de los niveles de ARNm. La producción de ARNm es un paso de requisito previo para la producción de proteína a partir de un gen y proporciona información sobre la actividad transcripcional de un loci génico.
La traducción de mRNA es un proceso altamente regulado y los ensayos globales destacan que los niveles de transcripción de mRNA explican menos de la mitad de la variación en las concentraciones de proteína.
Por ejemplo, si reemplazo la secuencia de ADN de un gen de interés con el ADN de GFP; y luego cuantificar los niveles de fluorescencia, ¿estoy midiendo la expresión génica del gen de interés O la expresión de la proteína?
Está midiendo tanto la expresión génica como la expresión de proteínas del promotor + loci del gen GFP. Si está interesado en la transcripción del promotor, medir la transcripción proporcionaría una medida más directa.
La expresión génica y la expresión de proteínas no son en absoluto lo mismo. Si bien los recuentos de los niveles de ARNm de un gen en particular pueden dar alguna indicación de la cantidad de proteína presente, muchas veces no es así. Del mismo modo, la cuantificación de los niveles de proteína no significa necesariamente que los niveles relativos de ARNm sean similares. Hay muchos puntos de regulación entre la ARN polimerasa que se desplaza a lo largo del gen y crea el pre-ARNm y la proteína que sale del ribosoma y se pliega y transporta a su lugar correcto en la célula. El ARNm se puede silenciar, degradar o evitar que se traduzca mediante una serie de mecanismos. Las propias proteínas están sujetas a ampliasregulación, con vidas medias que pueden variar de segundos a semanas. Por supuesto, los genes también están regulados de muchas maneras diferentes, desde proteínas represoras hasta ADN metilado e histonas modificadas químicamente, y la cantidad de complejos de polimerasa en el ADN y su velocidad de transcripción relativa también están bajo control regulatorio.
Si reemplazo la secuencia de ADN de un gen de interés con el ADN de GFP; y luego cuantificar los niveles de fluorescencia, ¿estoy midiendo la expresión génica del gen de interés O la expresión de la proteína?
Estás cuantificando los niveles de proteína de GFP . Los mRNA pueden estar sujetos a una regulación específica de secuencia (como siRNA), por lo que no puede decir absolutamente que los niveles de GFP son iguales a su producto genético de interés. Muchas veces serán proporcionales, pero otras no, por lo que deberá realizar otros experimentos para verificar los resultados.