Se están investigando en un estudio tres proteínas A, B y C de igual peso molecular. Contienen seis, cuatro y cuatro residuos de cisteína respectivamente. Solo las proteínas A y B se trataron con β-mercaptoetanol (que reduce el enlace disulfuro) y se calentaron en un baño de agua hirviendo durante unos minutos. ¿Cuál de los siguientes se espera en la ejecución del gel SDS PAGE?
a. La proteína C se moverá más rápido.
b. La proteína B se moverá más rápido.
C. Las proteínas A y B se moverán a la misma velocidad pero más rápido que la C.
d. Las proteínas B y C se moverán a la misma velocidad.
Antes de saber la respuesta pensé que la respuesta sería b. Porque como la Proteína A tiene la mayoría no. de aminoácidos, por lo que seguramente estará detrás de la proteína B y C. Y para la proteína B y C, dado que la proteína B ha estado en un entorno reductor, no formará puentes disulfuro, pero la proteína C sí, por lo que será más abundante y, por lo tanto, estará detrás de la proteína B. Entonces, ¿B será más rápido?
Pero la clave de respuesta dice C, no estoy muy seguro de cómo.
Entonces la respuesta es C. Antes de saber la respuesta pensé que la respuesta sería b. Porque como la Proteína A tiene la mayoría no. de aminoácidos, por lo que seguramente estará detrás de la proteína B y C. Y para la proteína b y c, como la proteína B ha estado en un entorno reductor, no formará puentes disulfuro, pero la proteína C lo hará, por lo que será más abundante y, por lo tanto, estará detrás de la proteína B. Entonces, ¿B será más rápida? Pero la clave de respuesta dice C
El enunciado del problema dice que todas las proteínas tienen el mismo peso molecular pero no dice cuántos aminoácidos tienen. Sí dice cuántos aminoácidos de cisteína tiene cada uno, pero no cuántos otros tipos tienen. La cisteína forma enlaces disulfuro, manteniendo curvas en la estructura de la proteína .
SDS es un detergente que está presente en el tampón de muestra SDS-PAGE donde, junto con un poco de ebullición y un agente reductor (normalmente DTT o B-ME para romper los enlaces disulfuro proteína-proteína), altera la estructura terciaria de proteinas Esto reduce las proteínas plegadas a moléculas lineales. SDS también recubre la proteína con una carga negativa uniforme, que enmascara las cargas intrínsecas de los grupos R.
Entonces, el objetivo de SDS-PAGE es hacer que las proteínas migren en el gel de acuerdo con el peso molecular sin tener en cuenta las cargas naturales que llevan los diversos componentes de los aminoácidos. Por lo tanto, las tres proteínas deberían migrar a las mismas velocidades en SDS-PAGE (no siendo A más lenta que B y C, como pensó OP).
Sin embargo, la proteína C no se trata con β-mercaptoetanol (B-ME), que es una parte importante de SDS-PAGE, por lo que retiene los enlaces cruzados de disulfuro y, por lo tanto, no es una cadena lineal de aminoácidos. Por lo tanto, C migrará más lentamente que A y B, y el resultado esperado es el indicado en la opción (c.).
Nicolás
Ravleen Kaur
Nicolás