Quiero hacer gránulos que consisten principalmente en lo siguiente:
y una enzima como componente activo.
¿Es necesario además agregar inhibidores de proteasa u otros estabilizadores para mantener la actividad de las enzimas por un período de al menos un año O es suficiente la conservación del ambiente seco?
La enzima se llama histaminasa y se extrae de la corteza renal a través de una serie de centrifugación, filtración y diálisis. Para ser más precisos, se trata de un extracto proteico líquido que contiene pequeñas cantidades de esta enzima. Hasta ahora no se añade ningún tampón, etc., al extracto proteico. Todo el proceso de purificación se realiza a 4°C. No sé cuánto tiempo la enzima es estable sin más preparación. Probablemente no tanto porque algunas proteasas deberían permanecer en el homogeneizado natural de la corteza renal porcina. Los demás componentes de los pellets son de calidad farmacéutica. El objetivo de este experimento es alimentar con gránulos a perros con molestias digestivas. Para este propósito, los gránulos obtendrán un recubrimiento entérico para sobrevivir al ambiente ácido del estómago.
Como probablemente pueda adivinar de mi comentario , hay muchos factores a tener en cuenta al pensar en la estabilidad de la proteína. Esto es lo que te recomendaría que hicieras.
Primero, asegúrese de que su extracto esté en un búfer neutral, como PBS, HEPES o algo similar. Este es un procedimiento bastante estándar cuando se trabaja con proteínas. A continuación, dado que se trata de un extracto de riñón, es probable que haya montones de proteasas, por lo que recomendaría encarecidamente agregar inhibidores de proteasa de amplio espectro y mantener el extracto lo más frío posible para inhibir cualquier actividad enzimática. También agregaría BSA a 10 mg/ml, tanto para estabilizar las proteínas y evitar que se precipiten mientras están en solución, como para disminuir las posibilidades de que las proteasas presentes ataquen la enzima de interés.
Una vez que haya estabilizado su solución, la dividiría en alícuotas y la liofilizaría . Las proteasas son más activas en solución, por lo que una vez secas, su actividad se reducirá aún más. Ahora puede agregar los ingredientes inertes (celulosa microcristalina, etc.), mezclar bien, presionar las tabletas y agregar el recubrimiento entérico. Finalmente, una vez que todo esté preparado, almacenaría el producto final a la temperatura más fría que sea conveniente. Nuevamente, esto inhibirá cualquier actividad enzimática y evitará la degradación.
No sé si tiene un ensayo funcional para determinar la actividad de la enzima de interés, pero si no lo tiene, le recomiendo desarrollar uno si es posible. De esta manera, puede probar la actividad de la preparación fresca del extracto y compararla con varias etapas de procesamiento en tabletas, especialmente los productos terminados, para asegurarse de que no haya perdido mucha actividad. También probaría tabletas al azar durante todo el año para asegurarme de que no hayan perdido actividad en el almacenamiento, de lo contrario, no podrá comparar sus resultados experimentales.
MattDMo
MattDMo
Lucas