¿Cómo se previene la contaminación por ARNasa en los experimentos basados ​​en ARN?

Debe tener cuidado con todo lo que entra en contacto con sus muestras. Cada espátula, vaso de precipitados y cada barra de agitación magnética deben estar libres de ARNasa.

Para el metal y la cristalería, solemos poner todo en un armario de secado a 200-250 °C durante unas horas. Eso debería deshacerse de las ARN de manera bastante eficiente.

Los productos químicos de ARN deben separarse de otros productos químicos si no todos en el laboratorio están trabajando con ARN. No deben pesarse con espátulas, sino simplemente verterse en un recipiente libre de ARNasa para evitar contaminar el recipiente de almacenamiento.

Use plástico desechable siempre que sea posible, debería poder realizar la mayoría de las cosas en halcones y tubos Eppendorf.

Tenga cuidado al realizar, por ejemplo, una preparación de ADN en el mismo banco que el trabajo de ARN. El primer tampón para la preparación de ADN contiene ARNasa.

Evite mantener sus tubos Eppendorf o halcones abiertos por mucho tiempo, eso debería reducir el potencial de contaminación.

Hemos tenido bastante buena experiencia con solo usar agua de un sistema Millipore y autoclavarla una vez, eso parece deshacerse de las ARN. Sé que esto no es seguro ya que las ARN pueden sobrevivir al autoclave, pero parece funcionar lo suficientemente bien.

Aquí hay algunos consejos de lo que hago habitualmente:

• limpie todas las superficies (incluyendo pipetas y guantes) con RNAse Away o similar
• hacer todo en hielo
• utilice tubos libres de ARNasa/ADNasa. Use también agua libre de ARNasa comercial (vale la pena la inversión).
• mantenga todos sus reactivos de ARN separados de sus reactivos de cultivo celular/trabajo con animales. Esterilice en autoclave todos sus tampones y no los deje reposar para siempre. Simplemente haga amortiguadores nuevos de vez en cuando.
• no hables por los tubos

Si sigue teniendo degradación después de todo lo anterior, considere cómo prepara su muestra. ¿Tiene suficientes inhibidores de ARNasa allí? ¿Utiliza una solución de conservación de ARN? ¿Está su tejido sentado durante mucho tiempo antes de la lisis? Si está extrayendo ARN de las células, intente usar trizol o un reactivo similar para preservar el ARN directamente de la lisis. Si obtiene el ARN de muestras de tejido, intente congelarlas en nitrógeno líquido.

Aparte de los consejos ya mencionados, cámbiate los guantes de vez en cuando.

Además, según mi experiencia (con el kit de Qiagen), mantener las muestras en hielo no debería suponer una gran diferencia.