¿Cómo se expresan y detectan los receptores de GLP-1?

Actualmente estoy trabajando con un péptido que es un análogo de glp-1, pero durante los estudios in vitro no puedo detectar la presencia de receptores de GLP1. La línea celular utilizada es Min-6. ¿Cómo lo detecto?

Si tiene un anticuerpo contra el receptor GLP-1, podría hacer un lisado celular completo y hacer un western. ¿Qué edad tienen tus células? Según esto alteran su comportamiento a lo largo del tiempo y alteran la expresión de los genes.
Prueba con anticuerpos policlonales. Puede ser que su anticuerpo no esté captando el epítopo.
¿La línea celular expresa ARNm de GLP-1? Puede usar la PCR de manera fácil y económica para amplificar el ARNm de GLP-1. Esa técnica sería exquisitamente sensible y específica para lo que desea, y no necesita preocuparse por los costosos anticuerpos.

Respuestas (1)

La pregunta no está clara, ya que no aclara si el receptor de GPL-1 es endógeno o está sobreexpresado. ¿También el GLP-1 pertenece a la misma especie de la que se origina Min-6 o pertenece a una especie diferente? Esos son puntos importantes ya que si el receptor es endógeno, el principal problema es la sensibilidad del método de detección, que a veces puede ser difícil de detectar una proteína endógena en relación con una sobreexpresada. Además, si el GPL-1 pertenece a una especie diferente, que está tratando de sobreexpresar en Min-6, es posible que no funcione ya que la maquinaria celular podría no respaldar su producción (aunque es poco probable) o su transporte a la superficie celular, que yo han tenido este problema antes. Podría ser que para los niveles de expresión particulares que tiene en esas células, si el GLP-1 está sobreexpresado o si no es endógeno, causa toxicidad y mata las células que lo expresan, por lo que no se ve ninguna expresión de GLP-1 (por ejemplo, debido a la activación excesiva del receptor). ¿También podría aclarar qué quiere decir con "analógico para glp-1"? ¿Significa esto que no es exactamente GPL-1 o es un homólogo u ortólogo, que está tratando de detectar usando un anticuerpo específico de GLP-1? eso podría volver a ser un problema si el GLP-1 Ab que está utilizando detecta una región del receptor, que no se conserva en sus homólogos. que está tratando de detectar usando un anticuerpo específico de GLP-1? eso podría volver a ser un problema si el GLP-1 Ab que está utilizando detecta una región del receptor, que no se conserva en sus homólogos. que está tratando de detectar usando un anticuerpo específico de GLP-1? eso podría volver a ser un problema si el GLP-1 Ab que está utilizando detecta una región del receptor, que no se conserva en sus homólogos.

En términos de soluciones, como se indica en los comentarios, la mejor manera de hacerlo es usar un Ab policlonal, que se eleva contra una gran sección del péptido en cuestión, lo que le brinda una mejor oportunidad de detección. Si eso no funcionó, es posible que deba recurrir a la detección de ARNm de GLP-1 mediante RT-PCR o qPCR, para lo cual deberá diseñar cebadores en función de su secuencia de GPL-1, con la que puede obtener ayuda aquí .