¿Qué es el inmunopanning (vs. inmunoprecipitación y FACS)?

El inmunopanning es esencialmente una inmunoprecipitación (IP) de células usando un anticuerpo inmovilizado en una superficie sólida, como una placa de cultivo celular . Convencionalmente, una IP se realiza utilizando agarosa pequeña o perlas magnéticas (~50 a 150 μm de tamaño) conjugadas con un anticuerpo o proteína A/G , y puede extraer proteínas individuales, complejos de proteínas y/o complejos de ácidos nucleicos.

Las células son mucho más grandes que los complejos de proteínas, obviamente, y en su mayor parte mucho más pequeñas que las perlas, pero pueden dañarse durante una IP tradicional, por lo que la inmunopanificación utiliza una única superficie sólida recubierta con el anticuerpo específico o el ligando de proteína de la superficie celular elegido. . En este artículo (PDF gratuito aquí ), se usó el transporte axonal retrógrado para etiquetar selectivamente poblaciones específicas de células neuronales con la porción extracelular de la toxina del cólera β (CTB) adsorbida en perlas fluorescentes, luego las células se purificaron usando un anticuerpo anti-CTB inmovilizado. .

La Clasificación de Células Activadas por Fluorescencia o FACS es otra forma de purificar las poblaciones de células. Las células se marcan con un marcador fluorescente (ya sea conjugado con un anticuerpo específico de un epítopo extracelular , mediante absorción como en el ejemplo anterior, o mediante la expresión de un transgén fluorescente como GFP ), luego se escanean en un citómetro de flujo. Las células que coinciden con ciertos parámetros o "puertas" en el software de la máquina se desvían a una cámara de recolección separada, lo que permite la generación de una población celular bastante pura.

Sin embargo, como señalan los autores en su artículo anterior, FACS requiere un equipo costoso (puede costar más de US$100 000), puede ser duro para las células y depende de la disponibilidad de un anticuerpo contra un marcador de superficie celular específico para la población deseada de células. El inmunopanning es mucho menos costoso, es más suave con las células y, en el caso de los autores, era realmente la única opción para purificar su población celular de interés, ya que no había biomarcadores específicos disponibles. Ciertamente no reemplazará a FACS a largo plazo, pero es otra herramienta para que los investigadores la usen cuando estudian tipos de células específicas.