Estaba leyendo este pequeño 'artículo' sobre la recombinación homóloga y el ratón knockout. De acuerdo con este artículo, primero extrae las células madre embrionarias de un blastocisto de pelaje gris, luego inserta la construcción y las vuelve a colocar en el blastocisto. Además, el texto dice:
A un ratón knockout se le han reemplazado ambos alelos de un gen en particular con un alelo inactivo. Esto generalmente se logra mediante el uso de recombinación homóloga para reemplazar un alelo seguido de dos o más generaciones de reproducción selectiva hasta que se aísla una pareja reproductora que tiene ambos alelos del gen objetivo inactivados o eliminados.
Sin embargo, lo que no entiendo aquí es que tenemos células de un embrión y, por lo tanto, tenemos células con ambos alelos. Por lo tanto, las regiones que rodean estos alelos serán homólogas, entonces, ¿por qué este paso daría como resultado un ratón heterocigoto (y por lo tanto requeriría una reproducción selectiva posterior) en lugar de un ratón homocigoto directamente?
Es una simple cuestión de probabilidad. Si la probabilidad de reemplazar un alelo es p , entonces la probabilidad de que se reemplacen dos alelos sería p 2 (tenga en cuenta que la última será menor porque las probabilidades son menores que uno).
Si tiene un marcador seleccionable como GFP, terminará seleccionando tanto heterocigotos como homocigotos, pero la frecuencia de los primeros será mucho más alta, especialmente cuando se considera el hecho de que la probabilidad de knock-out/in mediada por recombinación homóloga es muy alta. bajo en células de mamíferos ( 10 -7 – 10 -5 ). Por lo tanto, la consanguinidad es una forma más fácil de obtener homocigotos que la selección de ESC. Además, la reproducción selectiva es inevitable porque en la primera ronda solo se producirán quimeras (no todos los ESC se reemplazan con los modificados).
Actualmente se están utilizando tecnologías como CRISPR para acelerar la tasa de reemplazo de genes.
reyboomie
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