Imagine que alguien trata de desarrollar un ratón knockout para un gen, pero esto resulta en letalidad para los homocigotos.
¿Es posible expresar ese gen mutante solo en un tejido específico de interés para tener una idea de qué fenotipo produce? ¿Alguien conoce un experimento que utilizó esta idea o algo similar?
Se llama mutación condicional .
Usted flox (coloque los sitios lox alrededor) del gen de interés y exprese la recombinasa Cre impulsada por el promotor específico del tejido de interés.
Ilustración de aquí :
Usando una variante activable químicamente de la recombinasa Cre ( cre-ER ), puede crear una desactivación en algunas células del tejido de interés, no en todas.
Adición : un método un poco extraño pero aún útil es producir KO por medio del sistema CRISPR/Cas9. La expresión específica de tejido de la proteína Cas9 junto con sgRNA específico de gen probablemente producirá KO en forma de mosaico. Uno de los aspectos positivos es que dicho enfoque requiere solo una línea transgénica, por ejemplo, Tg ( promotor : Cas9; sgRNA)
Adición : (a través de la sugerencia de WYSIWYG) puede expresar shRNA u otro producto que interfiere en la transcripción de genes del promotor que solo está activo en un tejido específico/período de tiempo específico. Y la belleza de la genética/bioingeniería es que puede combinar varios métodos para un control adicional, robustez, eficiencia, etc.
Tomado de aquí :
KO de gen inducible y específico de venta con shRNA
Para leer más:
http://cre.jax.org/introduction.html
http://link.springer.com/protocol/10.1385/1-59259-065-9:477#page-1
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Volví a leer la pregunta OP y, como se comentó, siento cierta confusión. Así que me gustaría mencionar también la forma de expresar un gen mutado en un tejido específico que, cuando se expresa de forma constitutiva (todo el tiempo, en todas partes), es letal. Imagine un oncogén muy fuerte. O algo como proteína tóxica para las células, por ejemplo, nitrorreductasa químicamente activable o Killer-red activable por luz . O podría ser una versión mutada de su proteína sináptica favorita que, cuando se expresa en todas las neuronas, causa un fenotipo letal severo.
Lo que haces es crear un animal transgénico con fusión transgén-GFP (nitroreductasa, KillerRed, etc. ) que tiene codones de parada floxados en el frente, y cruzar ese animal con transgénico con CreER específico de tejido (por ejemplo). Lo que obtienes es un animal que, cuando se le inyecta tamoxifeno, comienza a expresar un gen mutado/proteína tóxica en el tejido de interés. Entonces está seguro de que solo las células positivas para GFP expresan ese gen. Así es como "expresas ese gen mutante solo en un tejido específico de interés para tener una idea de qué fenotipo produce".
Cre +/0; target +/flox
ratones de F1 con los target flox/flox
de F0 para generar Cre +/0; target flox/flox
en F2.
shigeta
aaaaa dice reincorporar a Monica
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shigeta
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shigeta