Determinación de la secuencia del oligorribonucleótido

El oligorribonucleótido X se trató con fosfatasa (para la eliminación de los fosfatos terminales 3' y 5'), luego con ARNasa T1, que escinde todos los enlaces fosfodiéster situados en una posición 3' de la guanosina de forma específica en 5'.ingrese la descripción de la imagen aquí

Como resultado, los oligonucleótidos L, M y N se generaron en cantidades iguales. Cada uno de ellos se trató adicionalmente con fosfatasa y se sometió a hidrólisis alcalina. Los resultados se enumeran en la siguiente tabla.

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Luego se modificó el experimento: el oligorribonucleótido X después del tratamiento con fosfatasa se hidrolizó con RNAaseP, que escinde todos los enlaces fosfodiéster en una posición 3' de las pirimidinas de una manera específica en 5'.

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Esta hidrólisis produjo cinco productos en concentraciones aproximadamente equimolares: monofosfato de uridina, monofosfato de citidina y oligonucleótidos P, Q y R. Después de la resolución de la mezcla y la hidrólisis alcalina de estos oligonucleótidos, se obtuvieron los datos enumerados en la siguiente tabla.

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Mi pensamiento: G no puede estar en el extremo 5 'de lo contrario, obtendríamos una sola guanosina también en el primer experimento. G tampoco puede estar en el penúltimo desde el extremo 3 'ya que no tenemos ningún sencillo. Tenemos A y C en un doblete, por lo que deben haber estado en el extremo 3'.

También tengo problemas para entender el significado de "mol/mol de oligorribonucleótido".

Estoy tratando de encajar en otros resultados, pero no puedo hacerlo. SE AGRADECERÁ MÁS UNA BUENA PISTA QUE UNA RESPUESTA DIRECTA.

Gracias

@Satwik En el comentario anterior, ¿te refieres a UMP y CMP?
@SatwikPasani Y por doblete no quieres decir que son uno tras otro porque no creo que eso sea posible.
@biogirl No está claro por lo que ha escrito hasta ahora que se dé cuenta de la importancia de obtener una citidina en lugar de un CMP en uno de los productos; significa, por ejemplo, que puede deducir la secuencia de M, que a su vez le permite para deducir la sucesión de Q.
@biogirl ¿Resolviste esto? En caso afirmativo, quería saber la respuesta que proporcionan (la fuente de la pregunta), para asegurarme de tener la solución correcta.
@SatwikPasani No he vuelto a intentar esta pregunta porque estaba ocupado en otras cosas. Pediré su ayuda si todavía no soy capaz de hacerlo. La respuesta a esta pregunta no se ha dado en la fuente. Gracias.
@satwik pasani ¡No! No puedo resolverlo. Por favor, dígame la respuesta (¡no la solución, ya que quiero "derivarla inversamente"!)
@biogirl Había olvidado mi derivación original pero rápidamente la volví a derivar. Por favor, compruebe si he cometido algún error a toda prisa. 5 ′ − tu A C GRAMO C C GRAMO A C − 3 ′
@SatwikPasani Muchas gracias: lo "revertiré"
@SatwikPasani ok, lo he hecho. Es lo correcto. Gracias una tonelada !

Respuestas (1)

Aquí hay algunos consejos que pueden ayudarlo: -

1) Obtienes gratis UMPy CMP(en contraste con UMP + Co CMP + U) en el segundo experimento antes de la hidrólisis alcalina.

2) Hay dos CMPoligorribonucleótidos en "N" y una citidina libre (y no CMP) en "M" y "Q".

3) Utilizar el hecho de que todos los oligorribonucleótidos fueron tratados con fosfatasa antes de ser sometidos a hidrólisis alcalina.

(Refiriéndose a su comentario, no sé por qué cree que la citidina consecutiva no es posible).

Estos son algunos consejos que me ayudaron a resolver esto. Si quieres más aclaraciones o la respuesta, dímelo en los comentarios.

Respuesta para la derivación inversa: - 5 ′ − tu A C GRAMO C C GRAMO A C − 3 ′

Determinación de la secuencia del oligorribonucleótido
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