Citometría de flujo para aprender sobre el ciclo celular

Vuelvo a publicar aquí mis datos de citometría de flujo porque me doy cuenta de que hay muchas personas dispuestas a ayudarme y puedo aprender mucho de ustedes.

En este laboratorio de cultivo celular, usamos Cell U-937 Lymphoblast. Y queremos aprender cómo podemos analizar el ciclo celular usando citometría de flujo.

¿Alguien podría ayudarme a explicar cómo leer el resultado de la citometría de flujo relacionado con el ciclo celular? Estaré muy contento de aprender de ustedes.

¡Gracias de antemano!ingrese la descripción de la imagen aquí

Respuestas (1)

La base para analizar los datos de citometría de flujo con respecto al ciclo celular es el hecho de que la síntesis de ADN ocurre en la fase S y, por lo tanto, las células antes de la fase S (G0/G1) tienen la mitad de la cantidad de ADN en comparación con las células después de la fase S ( G2). [La fase M dura demasiado poco para ser relevante para este tipo de análisis]. Las señales que tienen menos ADN que las células de la fase G0/G1 son artefactos o células apoptóticas con ADN fracturado (estas se etiquetan como sub G1).

Para medir la cantidad de ADN por célula se utiliza el colorante PI (yoduro de propidio), ya que se une cuantitativamente al ADN. Por lo tanto, la distribución de la señal de PI puede tomarse como una distribución de las diferentes etapas del ciclo celular.

Este artículo de wikipedia también explica el análisis con más detalle y proporciona más referencias.

¡Gracias por su respuesta! ¿Y puedo preguntar qué representa el 100 % Sub G1 en el control sin manchas? ¿También es célula muerta? o simplemente una población de células antes de pasar por el ciclo celular? @Nicolai
@Sokviseth En una muestra sin teñir, no se agregó colorante PI. Por lo tanto, no se puede detectar ningún ADN en estas células (incluso si está allí), por lo que no se puede decir en qué parte del ciclo celular se encuentran. Este control solo se realiza para detectar problemas con la tinción de PI.
Ah, ya veo :-). Y me pregunto una cosa más por qué la cantidad de células en (diagrama de diagrama de puntos) Ninguno es menor que la de rapamicina (87,8 frente a 91,4). Dado que la rapamicina puede inhibir el ciclo celular, ¿por qué aumenta la cantidad de células? @Nicolai
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