Etiquetado T7 junto a Met

¿Seguirá funcionando una etiqueta T7 si se coloca junto a un codón de inicio? Es decir, ¿seguirá funcionando con un Met adjunto en la secuencia de aminoácidos?

¡Gracias!

Las preguntas de la tarea están fuera de tema a menos que demuestre algún esfuerzo para resolverlas usted mismo. No hacer ninguna investigación por ti mismo es lo mismo.
Esta no es una pregunta de tarea. Somos un equipo de investigación de pregrado (iGEM) haciendo una pregunta ya que necesitamos saber esto para diseñar nuestro proyecto de investigación. Simplemente redacté mis pensamientos muy claramente, ningún maestro ni profesor escribió esto.
Entonces probablemente deberías explicar esto mejor en tu pregunta. De lo contrario, podría estar cerrado.
@Kathryn si su equipo no puede encontrar ningún recurso local para responder a sus preguntas sobre el diseño de su proyecto de investigación, puede encontrar el Catálogo de New England Biolabs como un recurso valioso con muchos mapas de plásmidos y genotipos de cepas bacterianas. Si tiene acceso a un laboratorio de investigación, es muy probable que tengan algunos manuales de clonación molecular y libros de recetas de laboratorio que también podrían ser valiosos. Según mi breve experiencia aquí, parece que las preguntas de tarea reales corren el riesgo de retratar al interrogador como "demasiado perezoso para hacerlo por sí mismo". Si tiene un objetivo más grande, revelarlo desde el principio puede ayudar.

Respuestas (2)

Por "todavía funciona", supongo que está preguntando si todavía será reconocido por un anticuerpo. Que podría. Se realizan fusiones de etiquetas T7 internas, aunque pueden requerir anticuerpos diferentes que las fusiones con etiquetas terminales.

Dicho esto, ¿tiene alguna razón para insertar la etiqueta después de la metionina? La etiqueta T7 ya comienza con metionina y funciona naturalmente para iniciar la traducción del gen10 T7. Los vectores basados ​​en pET también lo contienen para este propósito.

ingrese la descripción de la imagen aquí[ fuente ]

En este vector, su gen de interés generalmente se inserta después de la etiqueta para crear una proteína de fusión (usando BamHI) o inmediatamente después del codón de inicio (usando NheI). En cualquier caso, se usa el codón de inicio de la etiqueta T7.

Muchas gracias. No sabíamos que la etiqueta T7 contenía una metionina, y estábamos colocando esta etiqueta después de un codón de terminación, por lo que asumimos que necesitábamos colocarla después de un codón de inicio (Met).

Necesita un sitio de unión ribosomal antes del codón inicial.

O me equivoco en lo que se pregunta...
Esto es más un comentario y tienes suficiente representante para hacerlo.
Etiquetado T7 junto a Met
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