Sigo un protocolo para obtener proteínas de las células de E.coli después de la sonicación.
Solía cultivar 6 litros de cultivos grandes y agregar IPTG para expresar la proteína. Centrifugo durante 10 minutos a 8.000 rpm y obtengo los gránulos. Luego hago sonicación y centrifugo de nuevo a 20.000 durante 1 hora.
Mi pregunta es: puedo hacer el ultimo paso de centrifugado a 4000 rpm por 2 hr? La centrífuga ya no funciona a alta velocidad (20.000 rpm)
Gracias
No, si usa solo centrifugación para separar proteínas de otras partes de la célula (bacteriana), necesita fuerzas centrífugas muy altas. La velocidad real (en rpm) que necesita para separar las proteínas solubles del resto de la célula depende principalmente del rotor de la centrífuga, porque ambos juntos determinan la aceleración que obtiene, que debe ser del orden de al menos 10 000 - 100 000 gramo.
Si no dispone de una ultracentrífuga (que funcione) , puede intentar precipitar las proteínas del lisado, lo que le permitiría utilizar una centrífuga normal para recogerlas. Sin embargo, esta no será una opción si su proteína no se puede volver a plegar correctamente y necesita que funcione.
WYSIWYG
gen lugar deRPM. Básicamente queremos saber la fuerza centrífuga que actúa sobre la muestra. ElRPMrequerido para una cantidad particular de fuerza centrífuga depende del radio del rotor.