¿Cómo visualizar el ECM?

Específicamente, me gustaría observar los cambios en la producción de HA (ácido hialurónico). En la mayoría de los casos, solo verá personas que tiñen la superficie celular o extraen células del cultivo para fijarlas y luego obtener imágenes. ¿Alguien sabe cómo analizar la ECM (matriz extracelular) y los proteoglicanos que rodean una célula si desea ver si una condición puede estar cambiando la forma en que una célula remodela su ECM? ¿Es incluso posible con algunas etiquetas fluorescentes?

¿Puedes definir algunas de esas siglas? Supongo que ECM es matriz extracelular y HA es ácido hialurónico, pero podría estar equivocado y podría haber escrito mal hialurónico.
Sí, lo siento --- ECM = matriz extracelular, HA = ácido hialurónico. Sé que una tinción típica de hematoxilina y eosina (H & E) detectará cosas que tienen carga negativa, como HA, pero ¿cómo se pueden reparar las células sin alterar la MEC? Además, me preguntaba si existen métodos para analizar la producción de ECM celular mediante fluorescencia o algún otro método que utilice una sonda que pueda observar con un microscopio.
Interesante pregunta. Afaik ECM es mucho más que solo HA, también contiene condoitina y otras cosas relacionadas con la glucosamina. Algunos de ellos son capaces de regular la reacción inmune, por ejemplo, el sulfato de condroitina puede reducir la producción de TNFa y, por lo tanto, la inflamación por artritis.
naturebiotech.com.tw/Fluorescent%20ECM%20Proteins.pdf Supongo que este estudio usa lo mismo: figshare.com/articles/… probablemente sea posible, pero nunca trabajé con ECM.
Tiene que haber algunos anticuerpos contra los componentes de la ECM que podría usar para el etiquetado inmunohistoquímico.

Respuestas (2)

Los diferentes componentes de la ECM se pueden teñir de manera diferente, pero dado que usted preguntó sobre el ácido hialurónico (HA), limitaré mi respuesta a su tinción.

Vea este documento. Utilizan proteína de unión a hialurano (HABP) como sonda específica para HA.

Debido a que la HA tiene una composición conservada muy simple y se expresa de manera ubicua en todos los animales que tienen una respuesta inmune desarrollada, la HA no es inmunogénica. Por lo tanto, no existen anticuerpos que reconozcan específicamente HA, y los métodos inmunohistoquímicos tradicionales de detección de HA no son posibles. Afortunadamente, se aisló (Hascall y Heinegård 1974; Tengblad 1979) y se adaptó como una sonda de HA una proteína muy específica y de unión fuerte, la proteína de unión al hialuronano (HABP), que está compuesta por el dominio de unión HA con el módulo de enlace del agrecano. (Ripellino et al. 1985). HABP ahora se emplea ampliamente para la detección específica de HA.

La HABP marcada con biotina se puede utilizar para procedimientos de visualización basados ​​en IHC.

El libro "Histología básica" de Junqueira y Carneiro reconoce el problema en la fijación histológica de la sustancia fundamental. Recomiendan liofilizar en nitrógeno líquido y luego eliminar el agua por alto vacío a una temperatura de -30 grados centígrados, lo que provocará la sublimación (hielo-->vapor). Luego se fija la muestra con un solvente no polar. Posteriormente se pueden utilizar tintes como PAS technic.

Nunca he hecho esto, solo estoy copiando del libro. Si ya tiene nitrógeno líquido, alto vacío y PAS en su laboratorio, esto podría ser más económico que HABP.

¿Cómo visualizar el ECM?
RespuestasAquíPolítica de privacidad1y, 0v