Cuando uso un precultivo con ampicilina en mi expresión de proteínas, tengo que deshacerme del medio de precultivo para evitar transportar demasiadas betalactamasas que destruirán la ampicilina en el cultivo principal. Para hacer esto, aglomeré las células y las resuspendí.
¿Qué métodos de resuspensión son los más adecuados si necesita que las bacterias vivan después? No estoy seguro de cuánta fuerza puedo aplicar sin dañar las bacterias, y la resuspensión muy suave lleva mucho, mucho tiempo.
¿Qué métodos se pueden utilizar para resuspender bacterias vivas y cuáles son los más rápidos?
Asumiendo que está hablando de E. coli : siempre que resuspenda las células en un líquido adecuado, por ejemplo, un medio fresco o un tampón, según mi experiencia, no tiene mucho de qué preocuparse: las células son muy robustas. Descubrí que diferentes cepas y condiciones de crecimiento dan gránulos con cualidades muy diferentes: algunos se resuspenden bastante bien con el vórtex. Si el gránulo parece grumoso, entonces la trituración es algo que siempre encontré que funciona: pipetear hacia arriba y hacia abajo hasta que el gránulo se rompa.
Si fuera a hacer algún tipo de medición fisiológica con las células resuspendidas, entonces podría requerir alguna verificación, pero si solo tiene la intención de volver a crecer e inducir la expresión, diría que darle a las células algo de tiempo para recuperarse en el nuevo medio (verifique que la absorbancia está aumentando) antes de inducir la expresión debería ser suficiente.
Pipeteando hacia arriba y hacia abajo SUAVEMENTE, cuanto más lento pipetee y más gruesa sea la punta, más suave será, o agitando LENTAMENTE, las altas velocidades de agitación en vórtex provocan una tensión de cizallamiento en la pared, al igual que el pipeteo rápido con puntas pequeñas
Las bacterias pueden tomar mucho, tenga más cuidado con la levadura y aún más cuidado con las células de mamíferos
shigeta