Tasa de GHz conteo de fotones individuales

La vida útil fluorescente de las moléculas utilizadas en aplicaciones biológicas tiende a estar en la escala de tiempo de sub-ns a unos pocos ns (digamos 0.8-4). Los métodos más directos para medir la vida útil suelen implicar la activación (ya sea explícita o mediante correlaciones de tiempo).

Pero esto es un despilfarro terrible, ya que la información se descarta de aquellos fotones que no llegaron en el momento seleccionado. Si tiene una muestra delicada, puede destruirla antes de terminar su medición; si tiene un proceso que varía rápidamente, el estado puede haber cambiado antes de que haya terminado de realizar la medición.

¿Cuál es el estado del arte en el conteo sostenido de fotones en el rango visible (quizás 450-600 nm), y está en el nivel donde uno podría cronometrar razonablemente cada fotón sin tener que reducir drásticamente las tasas de conteo por debajo del tiempo de vida de la fluorescencia? La fotofísica admite la medición de la vida útil a una velocidad de MHz (~ 100 fotones en intervalos de 10 ns), pero ¿es práctico hacer esto realmente?

Aunque hay una variedad de opciones disponibles para el conteo de fotones (PMT, APD, GaAsP), ha sido difícil para mí obtener una imagen precisa de las velocidades y limitaciones de varios dispositivos realmente disponibles, o de los límites físicos para un determinado tipo. del esquema de detección. Por ejemplo, ¿los PMT sufren de tiempos de lectura borrosos debido a la distribución de longitudes de trayectoria de electrones en la cascada? ¿Los efectos térmicos hacen que los APD sean inútiles para una lectura sostenida de alta velocidad, incluso si son lo suficientemente pequeños como para que la capacitancia no sea una barrera importante para la recarga? (¿O la capacitancia es increíblemente mala para las velocidades de GHz, incluso con dispositivos realmente pequeños, por ejemplo, 100 um cuadrados?)

¿De qué parte del espectro estás hablando?
¿Quiere decir algo así como imágenes de por vida de fluorescencia (FLIM)?
@biologue - Sí, la aplicación sería FLIM. (Y/o multiplexación temporal).

Respuestas (2)

Es casi seguro que se puede hacer que funcione un esquema utilizado por varios detectores de física de partículas actuales (aunque generalmente involucra electrónica personalizada de alta velocidad que es bastante costosa; tal vez un sistema pequeño pueda salirse con la suya con solo un buen FPGA ...).

El esquema básico es digitalizar continuamente la salida de los detectores primarios (PMT o lo que sea) en un búfer circular de búferes circulares. Las dos instancias de este sistema con las que he trabajado usaban anchos de ADC de 8 -- 32 norte s , pero no hay nada especial en eso: podría bajar a alrededor de 1 ns con bastante facilidad y alrededor de 0.1 norte s debería ser posible.

En el nivel de la electrónica, la señal principal se preamplifica (si es necesario/se desea, a menudo la ganancia del detector principal es suficiente) y se divide (al menos) en el disparador y la electrónica digital.

La electrónica digital está respaldada por norte topes circulares de METRO muestras cada uno. Cada búfer también mantiene punteros al inicio y al final de los datos escritos recientemente. En un momento dado, el sistema está trabajando en la muestra. metro [ 0 , METRO ) de tampón norte [ 0 , norte ) ; se escribe la muestra y se avanza la muestra de trabajo metro := ( metro + 1 ) modificación METRO . En el caso de que no ocurra ningún disparador, el sistema puede sobrescribir continuamente los datos "poco interesantes" como metro ciclos a través de toda la gama.

Cuando ocurre un disparador, el sistema avanza el búfer norte := ( norte + 1 ) modificación norte para que los búferes más recientes no se sobrescriban.

El sistema de adquisición de datos puede luego leer los búfer bloqueados a medida que haya tiempo disponible y reconstruir las partes "interesantes" de la señal. (Si necesita saber cómo se ven las partes "poco interesantes" de la señal, siempre puede generar un disparador falso para bloquear la "nada"; esto se llama un disparador de "sesgo mínimo" o "aleatorio" y generalmente necesita uno .)

El tamaño de los búferes individuales se elige para garantizar que toda la señal esté en una sola ventana bloqueada. La cantidad de búferes que necesita depende de la tasa esperada y la latencia de lectura. Necesita algún esquema para lidiar con los desencadenantes que se acerquen tanto que el "siguiente" búfer aún contenga datos obsoletos (solo parcialmente sobrescritos) y otros problemas que estoy seguro de que puede ver por sí mismo si lo piensa.

Esto no necesariamente cuenta los fotones, le permite reconstruir aproximadamente la señal analógica del detector con una granularidad similar al tiempo en el orden del ancho de la muestra. Por lo tanto, no necesariamente puede notar la diferencia entre, digamos, dos fotones verdes en estrecha coincidencia y un fotón cercano al UV, pero esto a menudo es suficiente.

Sospecho que los osciloscopios de captura de alta velocidad hacen algo similar internamente.

Esto definitivamente es parte de la solución (+1), pero afortunadamente uno puede comprar tarjetas ADC que hacen exactamente esto con METRO = 2 mientras presenta la mitad de los datos ya escritos para el procesamiento de FPGA. Pero si los detectores aguas arriba no producen una señal analógica adecuada, no sirve de nada; realmente debe contar los tiempos de llegada de los fotones para que esto funcione, lo que significa que debe contar los fotones.
Rex, obtenemos discriminación de dos señales en una escala de tiempo de 2 contenedores ADC, y un tiempo de pico único bastante mejor que 1 contenedor ADC. No sé si eso es lo suficientemente bueno.
Eso es lo suficientemente bueno, y eso es lo que esperaría con los detectores apropiados. Pero , ¿ qué detectores son apropiados? Elegir entre APD, PMT, HPD, etc. no parece trivial, y tomar la decisión equivocada parece que podría dañarlo a uno por un factor de 2 o más en un régimen donde los factores de 2 son realmente importantes.
Realmente solo conozco bien los PMT. Puede obtener un buen comportamiento de pulso múltiple, pero pagará por ello. Especialmente si también desea una alta ganancia (10 millones). También podría considerar los MCP con instrumentación de grano fino: las probabilidades de obtener dos aciertos en un solo detector disminuyen si tiene muchos canales independientes.
¿Los PMT no tienen serios problemas de corriente oscura (a menos que se enfríen criogénicamente)?
@AntillarMaximus Lo hacen, pero es muy confiable, por lo que simplemente puede restarlo; por supuesto, eso impone exigencias al diseño electrónico. En una de las aplicaciones en las que estoy involucrado, son criogénicos (dentro de un detector de argón líquido), por lo que incluso eso no es un problema.
@dmckee No creo que la resta funcione bien para los NIR. Al menos los que usamos no eran lo suficientemente buenos a 860nm. En su lugar, cambiamos a los módulos de conteo de fotones de PerkenElmer.
Las características de rendimiento de @AntillarMaximus PMT varían mucho entre los diseños de tubos y las configuraciones de base. En los dos experimentos con neutrinos en reactores en los que participé, tenemos decenas de miles de años de tubo funcionando con dispositivos a temperatura ambiente con una ganancia muy alta, esencialmente sin eventos oscuros por encima del nivel de señal de 1/4 o 1/3 SPE. Nunca he usado tubos NIR, pero supongamos que tienen una relación DN/SPE de un factor de siete peor (2 para la energía del fotón y aproximadamente mi para el tamaño de las fluxaciones térmicas).

A partir de febrero de 2016, hay dos formas de contar fotones a velocidades de más de GHz que son asequibles y técnicamente sólidas. La tecnología ha avanzado, a diferencia de las fanfarronadas por exceso de especificaciones. Hamamatsu fabrica un tubo híbrido R10467U-40 con un 45 % de QE en el visible y la capacidad de contar fotones a varias velocidades de GHz. Esto se ha logrado para LIDAR utilizando un láser YAG duplicado en NPS. Las señales Lidar son una combinación de decaimiento exponencial y 1/R^2, y el tubo híbrido es excelente para señales decrecientes. Esto es similar al decaimiento de la fluorescencia pero más difícil debido al amplio rango dinámico y la señal extremadamente variable. Hamamatsu tiene otro tubo que también permitirá el conteo sostenido de GHz que funcionaría pero no está tan adaptado a esta aplicación.

Hay literatura en la última página del siguiente enlace web que compara las fortalezas y debilidades de varios detectores en Acerca del conteo de fotones. Los fabricantes no suelen señalar las debilidades de varios detectores, pero este artículo lo hace basándose en 40 años de experiencia.

http://www.photoncounting.net/

Recientemente se ha desarrollado y probado una nueva interfaz de salida digital para el tubo híbrido. El contador de fotones en el enlace puede hacer bins de 250 ps usando los cuatro canales, o uno puede pagar 10 veces más y obtener una resolución de bin ligeramente mejor. Dos de los amplificadores en el enlace permitirían el conteo de fotones de 2 GHz.

A diferencia de los multiplicadores de electrones, el tubo híbrido puede recuperarse de una señal grande en un nanosegundo sin cola de descomposición. La mejor manera de medir con precisión la vida útil de los fluorescentes sería recolectar grandes cantidades de fotones en lugar de medir su tiempo de llegada en unos pocos picosegundos, y el conteo de fotones de 10 MHz tendría dificultades para hacer esto. La técnica de conteo de fotones Ghz es una gran mejora con respecto a la técnica de corte de luz de ultracentrífuga de 20,000 rpm que he usado para medir tiempos de vida de descomposición de subnanosegundos con un PMT en la edad oscura.

El costo total de un sistema de GHz, suponiendo que uno tenga un osciloscopio digital, debería ser menos de cuatro mil dólares. La mayoría de las empresas ya no publican sus precios para los contadores de fotones. Dos empresas que fabrican sistemas ultrarrápidos son:

http://www.fastcomtec.com/products/ultra-fast-photon-counters.html

y

http://www.becker-hickl.de/

Estos contadores de fotones suelen ser caros: de 5000 a 15 000 UE. La excelente bibliografía de Becker-hickl describe medidas del tubo híbrido y técnicas para el decaimiento de la fluorescencia.

Ahora hay chips lógicos digitales asequibles disponibles con tiempos de subida de 30 picosegundos y tasas de alternancia de más de 10 GHz. Es hora de actualizar esta pregunta.

Este es un gran recurso de información, ¡justo lo que estaba buscando cuando hice la pregunta! (Aunque la tecnología realmente no existía en forma pulida cuando pregunté). ¡Gracias!