¿Se puede considerar el "Cas9" (involucrado en el mecanismo Crispr-cas9) como una enzima de restricción?

Tengo muchas preguntas sobre la enzima Cas9. Cuando el complejo Cas9-guideRNA (crRNA y transcrRNA) se une a la secuencia de ADN, ¿cuál es el tipo de enlace que corta el Cas9? ¿El Cas9 degrada toda la secuencia de ADN complementaria al ARN guía?

Si la pregunta anterior es "No", entonces ¿cómo se determina la secuencia que se va a cortar en el ADN complementario al ADN guía? ¿Qué tipo de enzima es Cas9?

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Respuestas (1)

Cas9 es una endo-desoxirribonucleasa ( UniProt-Q99ZW2 ). También tiene una actividad de exonucleasa 3'-5' mediante la cual recorta un poco el ADN del sitio de corte (pero no demasiado).

Aunque Cas9 es una endonucleasa y se desarrolla como un mecanismo de inmunidad contra los virus (como las enzimas de restricción), no se consideran enzimas de restricción. Una de las diferencias más importantes es que las enzimas de restricción no necesitan un ARN o un ADN como atadura para identificar los sitios objetivo en el ADN; sus dominios de unión a ADN pueden reconocer los sitios de restricción por sí mismos.

Cas9 no puede simplemente escindir cualquier ADN complementario al ARN guía. Necesita secuencias PAM ( motivos adyacentes protoespaciadores ) adyacentes al sitio objetivo para escindir este último.

Para obtener más información, consulte la página de wikipedia sobre CRISPR o lea una reseña .

¿Se puede considerar el "Cas9" (involucrado en el mecanismo Crispr-cas9) como una enzima de restricción?
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